ࡱ > * k l m n o p q r s t u v w x y z { | } ~ M H bjbj== { W W w E l h h / E JF JF `F ^
l op $ N n d A cr Y ^ cr cr A 1 JF `F V 1 1 1 cr nk n JF `F 1 cr 1 1 2 ) , `F t/ @oh L w+ . , w l 0 + ү `
ү , 1 R @ ( Aus dem Institut fr Tierhygiene und ffentliches Veterinrwesen
der Veterinrmedizinischen Fakultt
der Universitt Leipzig
Charakterisierung von caninen und felinen Parvoviren
in archiviertem Organmaterial
aus den Jahren 1970 bis 1978
Inaugural-Dissertation
zur Erlangung des Grades eines
Doctor medicinae veterinariae (Dr. med. vet.)
durch die Veterinrmedizinische Fakultt
der Universitt Leipzig
eingereicht von
Nicola Rckert
aus Bochum
Leipzig, 2007
Mit Genehmigung der Veterinrmedizinischen Fakultt der Universitt Leipzig
Dekan: Prof. Dr. Karsten Fehlhaber
Betreuer: Prof. Dr. Uwe Truyen
Gutachter:
1.Gutachter: Prof. Dr. Uwe Truyen
Institut fr Tierhygiene und ffentliches Veterinrwesen
der Veterinrmedizinischen Fakultt der Universitt Leipzig
2.Gutachter: Prof. Dr. Volker Moennig
Institut fr Virologie
Stiftung Tierrztliche Hochschule Hannover
3.Gutachter: Prof. Dr. Heinz-Adolf Schoon
Institut fr Veterinr-Pathologie
der Veterinrmedizinischen Fakultt der Universitt Leipzig
Tag der Verteidigung: 16.01.2007
Fr meine Eltern
In Liebe und Dankbarkeit
Inhaltsverzeichnis
TOC \o "1-3" \h \z HYPERLINK \l "_Toc142295253" 1 Einleitung PAGEREF _Toc142295253 \h 1
HYPERLINK \l "_Toc142295254" 2 Literaturbersicht PAGEREF _Toc142295254 \h 2
HYPERLINK \l "_Toc142295255" 2.1 Entdeckung des CPV-2 als Pathogen PAGEREF _Toc142295255 \h 2
HYPERLINK \l "_Toc142295256" 2.2 Pathogenese, Klinik und Pathologie einer Infektion mit CPV/ FPV PAGEREF _Toc142295256 \h 3
HYPERLINK \l "_Toc142295257" 2.3 Taxonomie der Parvoviren PAGEREF _Toc142295257 \h 5
HYPERLINK \l "_Toc142295258" 2.4 Das Genus Parvovirus PAGEREF _Toc142295258 \h 6
HYPERLINK \l "_Toc142295259" 2.5 Morphologie PAGEREF _Toc142295259 \h 7
HYPERLINK \l "_Toc142295260" 2.6 Genomorganisation PAGEREF _Toc142295260 \h 9
HYPERLINK \l "_Toc142295261" 2.7 Replikation PAGEREF _Toc142295261 \h 11
HYPERLINK \l "_Toc142295262" 2.8 Wirtsspektren von CPV und FPV PAGEREF _Toc142295262 \h 13
HYPERLINK \l "_Toc142295263" 2.9 Transferrinrezeptor PAGEREF _Toc142295263 \h 14
HYPERLINK \l "_Toc142295264" 2.10 Evolutionre Mechanismen des Caninen Parvovirus PAGEREF _Toc142295264 \h 15
HYPERLINK \l "_Toc142295265" 2.11 Theorien zur Entstehung des CPV PAGEREF _Toc142295265 \h 19
HYPERLINK \l "_Toc142295266" 3 Material und Methoden PAGEREF _Toc142295266 \h 21
HYPERLINK \l "_Toc142295267" 3.1 Material PAGEREF _Toc142295267 \h 21
HYPERLINK \l "_Toc142295268" 3.1.1 Probenauswahl PAGEREF _Toc142295268 \h 21
HYPERLINK \l "_Toc142295269" 3.2 Methoden PAGEREF _Toc142295269 \h 22
HYPERLINK \l "_Toc142295270" 3.2.1 Probennahme PAGEREF _Toc142295270 \h 22
HYPERLINK \l "_Toc142295271" 3.2.2 Aufreinigung der Proben PAGEREF _Toc142295271 \h 22
HYPERLINK \l "_Toc142295272" 3.2.3 Auswahl der Oligonukleotide PAGEREF _Toc142295272 \h 22
HYPERLINK \l "_Toc142295273" 3.2.4 Polymerase-Kettenreaktion PAGEREF _Toc142295273 \h 25
HYPERLINK \l "_Toc142295274" 3.2.5 Agarose-Gel-Elektrophorese PAGEREF _Toc142295274 \h 28
HYPERLINK \l "_Toc142295275" 3.2.6 Klonieren der PCR-Amplifikate in Escherichia coli PAGEREF _Toc142295275 \h 29
HYPERLINK \l "_Toc142295276" 3.2.7 Aufreinigung der PCR-Produkte PAGEREF _Toc142295276 \h 30
HYPERLINK \l "_Toc142295277" 3.2.8 Sequenzierung der PCR-Amplifikate PAGEREF _Toc142295277 \h 30
HYPERLINK \l "_Toc142295278" 3.2.9 Bearbeitung und Analyse der Sequenzen PAGEREF _Toc142295278 \h 31
HYPERLINK \l "_Toc142295279" 3.2.10 Tierartspezifische PCR PAGEREF _Toc142295279 \h 33
HYPERLINK \l "_Toc142295280" 3.2.11 Immunhistochemie PAGEREF _Toc142295280 \h 33
HYPERLINK \l "_Toc142295281" 4 Ergebnisse PAGEREF _Toc142295281 \h 34
HYPERLINK \l "_Toc142295282" 4.1 Probenauswahl PAGEREF _Toc142295282 \h 34
HYPERLINK \l "_Toc142295283" 4.2 Sensitivitt der PCR PAGEREF _Toc142295283 \h 34
HYPERLINK \l "_Toc142295284" 4.3 Nachweis der parvoviralen DNA PAGEREF _Toc142295284 \h 35
HYPERLINK \l "_Toc142295285" 4.4 Ergebnisse der PCR zur vollstndigen Sequenzierung des VP2-Gens PAGEREF _Toc142295285 \h 36
HYPERLINK \l "_Toc142295286" 4.5 Ergebnisse der Immunhistochemie und der tierartspezifischen PCR PAGEREF _Toc142295286 \h 39
HYPERLINK \l "_Toc142295287" 4.6 Sequenzanalyse PAGEREF _Toc142295287 \h 40
HYPERLINK \l "_Toc142295288" 4.6.1 Sequenzierung PAGEREF _Toc142295288 \h 40
HYPERLINK \l "_Toc142295289" 4.6.2 Sequenzanalyse der Hunde- und Katzenproben PAGEREF _Toc142295289 \h 40
HYPERLINK \l "_Toc142295290" 5 Diskussion PAGEREF _Toc142295290 \h 46
HYPERLINK \l "_Toc142295291" 5.1 Nachweismethoden PAGEREF _Toc142295291 \h 46
HYPERLINK \l "_Toc142295292" 5.2 Sequenzanalyse PAGEREF _Toc142295292 \h 47
HYPERLINK \l "_Toc142295293" 5.3 Abschlieende Betrachtung PAGEREF _Toc142295293 \h 49
HYPERLINK \l "_Toc142295294" 6 Zusammenfassung PAGEREF _Toc142295294 \h 50
HYPERLINK \l "_Toc142295295" 7 Summary PAGEREF _Toc142295295 \h 52
HYPERLINK \l "_Toc142295296" 8 Literaturverzeichnis PAGEREF _Toc142295296 \h 54
HYPERLINK \l "_Toc142295297" 9 Anhang PAGEREF _Toc142295297 \h 62
HYPERLINK \l "_Toc142295298" 9.1 Chemikalien und Reagenzien PAGEREF _Toc142295298 \h 62
HYPERLINK \l "_Toc142295299" 9.2 Tabellen PAGEREF _Toc142295299 \h 63
HYPERLINK \l "_Toc142295300" 9.3 Verwendete Codes PAGEREF _Toc142295300 \h 73
HYPERLINK \l "_Toc142295301" 9.4 Vergleich der Parvovirussequenzen aus den Katzengeweben mit der Referenzsequenz FPV-b PAGEREF _Toc142295301 \h 75
10 Danksagung 88
Abkrzungsverzeichnis
A Adenin
Ala Alanin
Arg Arginin
AS Aminosure
Asn Asparagin
Asp Aspartat
bp Basenpaare
BFPV Polarfuchs-Parvovirus (blue fox parvovirus)
C Cytosin
CPV canines Parvovirus
DNA Desoxyribonukleinsure (Desoxyribo-nucleid-acid)
dNTP Desoxyribonukleosidtriphosphat
ds doppelstrngig (double-stranded)
EDTA Ethylendiamintetraessigsure
FPV felines Panleukopenie-Virus
G Guanin
g Gramm
Gly Glycin
Ile Isoleucin
ITR inverted terminal repeats
IZKF Interdisziplinres Zentrum fr klinische Forschung der Universitt Leipzig
kD Kilo-Dalton
Leu Leucin
Lys Lysin
M Molar
Met Methionin
MEV Nerz-Enteritis-Virus (mink enteritis virus)
min Minuten
ml Milliliter
mM Millimol
mRNA messengerRNA (Boten-RNA)
(g Mikrogramm
(l Mikroliter
nm Nanomol
NS1 Nichtstrukturprotein1
NS2 Nichtstukturprotein2
NS3 Nichtstrukturprotein3
Nt Nukleotid
OD Optische Dichte
ORF Leserahmen (open reading frame)
PCR Polymerase Kettenreaktion
pg Pikogramm
pmol Pikomol
RDPV Marderhund-Parvovirus (raccoon dog parvovirus)
RNA Ribonukleinsure (Ribo-nucleid-acid)
RPV Waschbr-Parvovirus (raccoon parvovirus)
Ser Serin
ss einzelstrngig (single-stranded)
Tris Tris(hydroxymethyl)aminomethan
Tyr Tyrosin
UV ultraviolettes Licht
V Volt
Val Valin
VP1 Virusstrukturprotein1
VP2 Virusstrukturprotein2
VP3 Virusstrukturprotein3
Tabellenverzeichnis
TOC \h \z \c "Tabelle" HYPERLINK \l "_Toc142193306" Tabelle 1:Die Familie der Parvoviridae* PAGEREF _Toc142193306 \h 6
HYPERLINK \l "_Toc142193307" Tabelle 2: Oligonukleotide PAGEREF _Toc142193307 \h 24
HYPERLINK \l "_Toc142193308" Tabelle 3: Zyklusbedingungen fr die Oligonukleotide M1RE+M2RE PAGEREF _Toc142193308 \h 26
HYPERLINK \l "_Toc142193309" Tabelle 4: Reaktionskomponenten des PCR Master Mix mit Volumen und Konzentrationsangaben PAGEREF _Toc142193309 \h 26
HYPERLINK \l "_Toc142193310" Tabelle 5: Reaktionskomponenten des Taq PCR Core Kit mit Volumen und Konzentrationsangaben PAGEREF _Toc142193310 \h 27
HYPERLINK \l "_Toc142193311" Tabelle 6: Viursisolate mit Angabe der Genbank-Nummern, Referenz, Herkunft und Jahr der Isolierung PAGEREF _Toc142193311 \h 32
HYPERLINK \l "_Toc142193312" Tabelle 7: Parvovirus-positive Hundeproben (1970-1978) PAGEREF _Toc142193312 \h 37
HYPERLINK \l "_Toc142193313" Tabelle 8: ausgewhlte Parvovirus-positive Katzenproben (1970-1978) PAGEREF _Toc142193313 \h 38
HYPERLINK \l "_Toc142193314" Tabelle 9: Nukleotid- und Aminosurenunterschiede im VP2-Gen aller Katzenproben im Vergleich mit FPV-b PAGEREF _Toc142193314 \h 42
HYPERLINK \l "_Toc142193315" Tabelle 10: Sequenzbereinstimmungen der Parvovirussequenzen der Katzenproben untereinander sowie mit FPV-b und CPV-d in Prozent PAGEREF _Toc142193315 \h 44
HYPERLINK \l "_Toc142193316" Tabelle 11: Ausgewhlte Proben (Hunde und Katzen) von 1980 1970 PAGEREF _Toc142193316 \h 63
HYPERLINK \l "_Toc142193317" Tabelle 12: Ausgewhlte Proben anderer Tierarten PAGEREF _Toc142193317 \h 66
HYPERLINK \l "_Toc142193318" Tabelle 13: Parvovirus-positive Proben bei Hunden (1970-1980) PAGEREF _Toc142193318 \h 67
HYPERLINK \l "_Toc142193319" Tabelle 14: Parvovirus-positive Proben bei Katzen (1970-1980) PAGEREF _Toc142193319 \h 69
HYPERLINK \l "_Toc142193320" Tabelle 15: Parvovirus-positive Proben anderer Tierarten: Waschbr PAGEREF _Toc142193320 \h 72
Abbildungsverzeichnis
TOC \h \z \c "Abbildung" HYPERLINK \l "_Toc142289746" Abbildung 1: elektronenmikroskopische Aufnahme des caninen Parvovirus PAGEREF _Toc142289746 \h 7
HYPERLINK \l "_Toc142289747" Abbildung 2: Schematische Darstellung des strukturellen Aufbaus des Viruskapsids autonomer Parvoviren PAGEREF _Toc142289747 \h 8
HYPERLINK \l "_Toc142289748" Abbildung 3: Kapsidstruktur (CPV/FPV) mit eingezeichneter Dreiecksuntereinheit (PARRISH u. HUEFFER 2006) PAGEREF _Toc142289748 \h 9
HYPERLINK \l "_Toc142289749" Abbildung 4: Replikation autonomer Parvoviren. Modifiziert nach COTMORE und TATTERSALL (1987) PAGEREF _Toc142289749 \h 12
HYPERLINK \l "_Toc142289750" Abbildung 5: Schema der Entstehung des caninen Parvovirus. Modifiziert nach HUEFFER et al. (2004) PAGEREF _Toc142289750 \h 16
HYPERLINK \l "_Toc142289751" Abbildung 6: Asymmetrische Untereinheit des CPV Kapsid mit Darstellung der Lokalisation substituierter Aminosuren auf der Kapsidoberflche (SHACKELTON et al. 2005a) PAGEREF _Toc142289751 \h 17
HYPERLINK \l "_Toc142289752" Abbildung 7: Verdnnungsreihe der Plasmid-DNA (von 10-4 bis10-13) PAGEREF _Toc142289752 \h 35
HYPERLINK \l "_Toc142289753" Abbildung 8: PCR-Amplifikate der Oligonukleotide M1RE+M2RE PAGEREF _Toc142289753 \h 36
HYPERLINK \l "_Toc142289754" Abbildung 9: PCR-Amplifikate der Oligonukleotidpaare A(f/r), A0(f/r),A1(f/r), A2(f/r), A3(f/r), A4(f/r), B(f/r), B1(f/r) (Hundeprobe 464 aus dem Jahr 1978) PAGEREF _Toc142289754 \h 38
HYPERLINK \l "_Toc142289755" Abbildung 10: Fortsetzung Abbildung 9; PCR-Amplifikate der Oligonukleotidpaare B1(f/r), B2(f/r), B3(f/r), B4(f/r), B5 (f/r), C(f/r), C1(f/r), M(f/r) (Hundeprobe 464 aus dem Jahr 1978) PAGEREF _Toc142289755 \h 39
Einleitung
Das canine Parvovirus (CPV-2) trat erstmals 1978 in den Hundepopulationen auf und verbreitete sich weltweit in einer schweren Pandemie. Die Infektion mit CPV-2 fhrte zu einer akuten Gastroenteritis und wies eine hohe Mortalitt bei Hundewelpen auf. Die pathologischen Befunde und die klinischen Erscheinungen der Erkrankung waren dem Erkrankungsbild einer Infektion mit dem Felinen Panleukopenie-Virus (FPV) sehr hnlich. Die vermutete nahe Verwandtschaft des neu aufgetretenen CPV-2 mit FPV wurde aufgrund genetischer und antigener Untersuchungen schnell nachgewiesen.
Ein bis zwei Jahre nach dem ersten Auftreten des caninen Parvovirus verdrngte eine neue antigene Variante (CPV-2a) das CPV-2 vollstndig aus den Hundepopulationen. Im Gegensatz zu CPV-2 ist diese Variante in der Lage neben Hunden, auch Katzen zu infizieren. Ab 1984 trat eine weitere antigene Variante (CPV-2b) auf, die zusammen mit CPV-2a in den Hundepopulationen bis heute koexistiert.
Die Unterschiede im Wirtsspektrum von FPV und CPV-2 basieren auf nur wenigen kodierenden Nukleotidaustauschen im VP2-Gen. Aufgrund der Aminosurevernderungen im Kapsidprotein (VP2) kommt es zu einer strukturellen Vernderung des Viruskapsids und zu einer nderung wesentlicher biologischer Eigenschaften des Virus.
Die Entstehung des CPV-2 konnte bis heute noch nicht vollstndig aufgeklrt werden. Retrospektiv wird angenommen, dass sich das canine Parvovirus aus dem Felinen Panleukopenie-Virus oder einem nahe verwandten Virus entwickelt hat. Neuere Studien, welche die Substitutionsraten von CPV-Sequenzen untersuchten, berechneten, dass CPV-2 bereits 10 Jahre vor 1978 in den Hundepopulationen vorgekommen sein musste. Basierend auf dieser Vermutung war es das Ziel dieser Arbeit CPV-2 aus archivierten Gewebeproben von Hunden und Katzen aus den Jahren 1970 bis 1978 zu isolieren, um einen mglichen Anzestor des caninen Parvovirus unter den frhen Isolaten des Virus zu identifizieren.
Literaturbersicht
Entdeckung des CPV-2 als Pathogen
In den spten 1970er Jahren wurde eine zum ersten Mal aufgetretene Infektionserkrankung bei Hundewelpen beschrieben, die eine akute infektise Gastroenteritis verursachte und eine hohe Mortalitt aufwies. Diese Erkrankung breitete sie sich weltweit in einer schweren Pandemie bei Hunden aus ADDIN REFMGR.CITE Parrish199074Emergence, natural history, and variation of canine, mink, and feline parvovirusesJournal74Emergence, natural history, and variation of canine, mink, and feline parvovirusesParrish,C.R.1990AnimalsAntigenic VariationCat DiseasesCatsDog DiseasesDogsgeneticsHumansimmunologymicrobiologyMinkParvoviridaeParvoviridae InfectionsRodent DiseasesveterinaryNot in File403450Adv.Virus Res.38James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:2171302Adv.Virus Res.1(PARRISH 1990b). Die Darmerkrankung war nach histopathologischen Untersuchungen und den klinischen Erscheinungen dem Erkrankungsbild des felinen Panleukopenie-Virus bei Katzen sehr hnlich. Eine Verwandtschaft zum FPV wurde durch genetische ADDIN REFMGR.CITE Parrish198875Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesJournal75Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesParrish,C.R.Aquadro,C.F.Carmichael,L.E.1988/10Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidComparative StudyDogsFeline panleukopenia virusGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentHemagglutinationHemagglutinins,ViralimmunologymicrobiologyMinkMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusRecombination,GeneticRepetitive Sequences,Nucleic AcidResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File293307Virology1662James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, IthacaPM:3176341Virology1Truyen199551Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal51Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMinkMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinePhylogenyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(PARRISH et al. 1988a; TRUYEN et al. 1995b) und antigene Untersuchungen ADDIN REFMGR.CITE Parrish198288Antigenic relationships between canine parvovirus type 2, feline panleukopenia virus and mink enteritis virus using conventional antisera and monoclonal antibodiesJournal88Antigenic relationships between canine parvovirus type 2, feline panleukopenia virus and mink enteritis virus using conventional antisera and monoclonal antibodiesParrish,C.R.Carmichael,L.E.Antczak,D.F.1982AnimalsAntibodies,MonoclonalAntigens,ViralComparative StudyDogsEnteritisEpitopesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHemagglutination Inhibition TestsImmunodiffusionimmunologymethodsmicrobiologyMinkParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelineResearch Support,Non-U.S.Gov'tNot in File267278Arch.Virol.724PM:6180709Arch.Virol.1Parrish198384Antigenic structure and variation of canine parvovirus type-2, feline panleukopenia virus, and mink enteritis virusJournal84Antigenic structure and variation of canine parvovirus type-2, feline panleukopenia virus, and mink enteritis virusParrish,C.R.Carmichael,L.E.1983/9analysisAnimalsAntibodies,MonoclonalAntigenic VariationAntigens,ViralBinding,CompetitiveCapsidCapsid ProteinsclassificationComparative StudyDogsEnteritisEpitopesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHemagglutinationHemagglutination Inhibition TestsimmunologyMinkNeutralization TestsParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelineRaccoonsRadioimmunoassayResearch Support,Non-U.S.Gov'tViral ProteinsNot in File401414Virology1292PM:6194613Virology1(PARRISH et al. 1982a; PARRISH u. CARMICHAEL 1983) in den folgenden Jahren nachgewiesen. In den ersten Jahren der Ausbreitung des caninen Parvovirus wurde auch eine bei Hundewelpen auftretende Myokarditis mit dieser Infektion in Zusammenhang gebracht ADDIN REFMGR.CITE Lenghaus198011Relationships of canine panleucopaenia (enteritis) and myocarditis paroviruses to feline panleucopaenia virusJournal11Relationships of canine panleucopaenia (enteritis) and myocarditis paroviruses to feline panleucopaenia virusLenghaus,C.Studdert,M.J.1980/3AnimalsCatsDog DiseasesDogsEnteritisetiologyisolation & purificationMyocarditisParvoviridaeParvovirus,FelineveterinaryNot in File152153Aust.Vet.J.563PM:6254483Aust.Vet.J.1(LENGHAUS u. STUDDERT 1980). Die erste publizierte Isolierung des caninen Parvovirus erfolgte 1978 in den USA ADDIN REFMGR.CITE Appel197971Isolation and immunisation studies of a canine parco-like virus from dogs with haemorrhagic enteritisJournal71Isolation and immunisation studies of a canine parco-like virus from dogs with haemorrhagic enteritisAppel,M.J.Scott,F.W.Carmichael,L.E.1979/8/25AnimalsbloodBody TemperatureDog DiseasesDogsEnteritisHemagglutination Inhibition TestsHemagglutination,ViralHemorrhageImmunizationimmunologyisolation & purificationmicrobiologyParvoviridaeprevention & controlTemperatureVaccinesveterinaryViral VaccinesNot in File156159Vet.Rec.1058PM:516347Vet.Rec.1(APPEL et al. 1979). Auch in Europa ADDIN REFMGR.CITE Osterhaus19803Isolation of a virus closely related to feline panleukopenia virus from dogs with diarrheaJournal3Isolation of a virus closely related to feline panleukopenia virus from dogs with diarrheaOsterhaus,A.D.van,Steenis G.de,Kreek P.1980analysisAnimalsAntigens,ViralCatsDiarrheaDisease OutbreaksDog DiseasesDogsEpitopesFecesFeline panleukopenia virusFemaleimmunologyisolation & purificationMalemicrobiologyNetherlandsParvoviridaeParvovirus,FelineveterinaryNot in File1121Zentralbl.Veterinarmed.B271PM:6158204Zentralbl.Veterinarmed.B1Burtonboy197932Canine hemorrhagic enteritis: detection of viral particles by electron microscopyJournal32Canine hemorrhagic enteritis: detection of viral particles by electron microscopyBurtonboy,G.Coignoul,F.Delferriere,N.Pastoret,P.P.1979AnimalsbloodDiarrheaDog DiseasesDogsDuodenumEnteritisFecesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusFemaleGastrointestinal HemorrhageHemagglutination,Viralimmunologyisolation & purificationMalemicrobiologyParvoviridaeultrastructureveterinaryNot in File111Arch.Virol.611-2PM:316320Arch.Virol.1(BURTONBOY et al. 1979; OSTERHAUS et al. 1980), Australien ADDIN REFMGR.CITE Kelly197833An enteric disease of dogs reselmbing feline panleucopaeniaJournal33An enteric disease of dogs reselmbing feline panleucopaeniaKelly,W.R.1978/12AnimalsCatsDog DiseasesDogsEnteritisFeline PanleukopeniapathologyveterinaryNot in File593Aust.Vet.J.5412PM:753224Aust.Vet.J.1(KELLY 1978), Canada ADDIN REFMGR.CITE Gagnon197934A possible parvovirus associated with an epidemic gastroenteritis of dogs in CanadaJournal34A possible parvovirus associated with an epidemic gastroenteritis of dogs in CanadaGagnon,A.N.Povey,R.C.1979/3/24AnimalsCanadaCells,CulturedDog DiseasesDogsFecesGastroenteritisgrowth & developmentisolation & purificationmicrobiologyParvoviridaeveterinaryVirus DiseasesNot in File263264Vet.Rec.10412PM:473507Vet.Rec.1(GAGNON u. POVEY 1979), Japan ADDIN REFMGR.CITE Azetaka198135Studies on canine parvovirus isolation, experimental infection and serologic surveyJournal35Studies on canine parvovirus isolation, experimental infection and serologic surveyAzetaka,M.Hirasawa,T.Konishi,S.Ogata,M.1981/4analysisAnimalsAntibodies,ViralDog DiseasesDogsimmunologyisolation & purificationmicrobiologyParvoviridaeResearch Support,Non-U.S.Gov'tveterinaryVirus DiseasesNot in File243255Nippon Juigaku.Zasshi432PM:7289337Nippon Juigaku.Zasshi1(AZETAKA et al. 1981) und Neuseeland ADDIN REFMGR.CITE Horner197936Isolation of a parvovirus from dogs with enteritisJournal36Isolation of a parvovirus from dogs with enteritisHorner,G.W.Hunter,R.Chisholm,E.G.1979/12AnimalsDog DiseasesDogsEnteritisisolation & purificationmicrobiologyParvoviridaeveterinaryVirus DiseasesNot in File280N.Z.Vet.J.2712PM:295110N.Z.Vet.J.1(HORNER et al. 1979) erfolgten Nachweise. Innerhalb krzester Zeit infizierte CPV weltweit sowohl wilde, als auch domestizierte Caniden. Um das Virus von dem frher beschriebenen caninen Parvovirus, dem canine minute virus (CnMV/CPV-1), unterscheiden zu knnen, wurde es als CPV-2 bezeichnet. Der erste Nachweis von caninen Parvoviren erfolgte retrospektiv in Griechenland durch den Nachweis von CPV-Antikrpern in einer Hundeprobe aus dem Jahr 1974 ADDIN REFMGR.CITE Koptopoulos19869Presence of antibody cross-reacting with canine parvovirus in the sera of dogs from GreeceJournal9Presence of antibody cross-reacting with canine parvovirus in the sera of dogs from GreeceKoptopoulos,G.Papadopoulos,O.Papanastasopoulou,M.Cornwell,H.J.1986/3/22AnimalsAntibodies,ViralComparative StudyCross ReactionsDog DiseasesDogsEnteritisGreeceHemagglutination Inhibition TestsimmunologyNeutralization TestsParvoviridaeRetrospective StudiesveterinaryNot in File332333Vet.Rec.11812PM:3705371Vet.Rec.1(KOPTOPOULOS et al. 1986c). Auch Untersuchungen von Hundeproben aus Belgien und den Niederlanden aus dem Jahr 1976/77 wiesen Antikrper gegen das CPV nach ADDIN REFMGR.CITE Osterhaus19803Isolation of a virus closely related to feline panleukopenia virus from dogs with diarrheaJournal3Isolation of a virus closely related to feline panleukopenia virus from dogs with diarrheaOsterhaus,A.D.van,Steenis G.de,Kreek P.1980analysisAnimalsAntigens,ViralCatsDiarrheaDisease OutbreaksDog DiseasesDogsEpitopesFecesFeline panleukopenia virusFemaleimmunologyisolation & purificationMalemicrobiologyNetherlandsParvoviridaeParvovirus,FelineveterinaryNot in File1121Zentralbl.Veterinarmed.B271PM:6158204Zentralbl.Veterinarmed.B1(OSTERHAUS et al. 1980). Neuere Studien, welche die Substitutionsraten von CPV-Isolaten untersuchten, vermuten, dass CPV-2 bereits 10 Jahre vor 1978 in den Hundepopulationen vorgekommen sein musste ADDIN REFMGR.CITE Shackelton2005104High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusJournal104High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusShackelton,L.A.Parrish,C.R.Truyen,U.Holmes,E.C.2005/1/11AnimalsBase SequenceCapsidclassificationDnaDogsEvolutionFeline PanleukopeniageneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,CaninePhylogenyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Selection (Genetics)Not in File379384Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1022pdf jaDepartment of Zoology, University of Oxford, South Parks Road, Oxford OX1 3PS, United KingdomPM:15626758Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1(SHACKELTON et al. 2005e). Ein bis zwei Jahre nach dem ersten Auftreten des CPV-2 wurde eine neue antigene Variante (CPV-2a) beschrieben, die das CPV-2 in den folgenden Jahren vollstndig verdrngte ADDIN REFMGR.CITE Parrish199172Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and feline panleukopenia virus using infectious plasmid clonesJournal72Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and feline panleukopenia virus using infectious plasmid clonesParrish,C.R.1991/7analysisAnimalsBase SequenceCapsidCatsCell LineCloning,MolecularDna,ViralDogsEpitopesFeline panleukopenia virusgeneticsHemagglutinationimmunologyisolation & purificationMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinePlasmidsRecombination,GeneticResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Restriction MappingultrastructureveterinaryNot in File195205Virology1831James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:1647068Virology1Parrish198582Natural variation of canine parvovirusJournal82Natural variation of canine parvovirusParrish,C.R.O'Connell,P.H.Evermann,J.F.Carmichael,L.E.1985/11/29analysisAnimalsAntigens,ViralDna,ViralDog DiseasesDogsgeneticsimmunologymicrobiologyParvoviridaeParvovirusResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.United StatesVariation (Genetics)Virus ReplicationNot in File10461048Science2304729PM:4059921Science1Parrish198876The global spread and replacement of canine parvovirus strainsJournal76The global spread and replacement of canine parvovirus strainsParrish,C.R.Have,P.Foreyt,W.J.Evermann,J.F.Senda,M.Carmichael,L.E.1988/5AnimalsCapsidCarnivoraclassificationComparative StudyDisease ReservoirsEuropegeneticsimmunologyisolation & purificationJapanmicrobiologyParvoviridaeParvoviridae InfectionsParvovirusResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.United StatesveterinaryViral VaccinesNot in File11111116J.Gen.Virol.69 ( Pt 5)James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:2836554J.Gen.Virol.1(PARRISH et al. 1985c; PARRISH et al. 1988c; PARRISH 1991b). Ab 1984 verbreitete sich in den Populationen eine weitere Variante (CPV-2b). In den USA ersetzte CPV-2b den vorherigen Typ CPV-2a fast vollstndig ADDIN REFMGR.CITE Parrish199170Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirusJournal70Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirusParrish,C.R.Aquadro,C.F.Strassheim,M.L.Evermann,J.F.Sgro,J.Y.Mohammed,H.O.1991/12Amino Acid SequenceanalysisAnimalsAntibodies,MonoclonalAntigens,ViralBase SequenceCapsidCatsCell LineDna,ViralDogsEvolutionGenes,Viralgeneticsimmunologyisolation & purificationMolecular Sequence DataMutationParvoviridaeParvovirusPhylogenyResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Restriction MappingultrastructureVariation (Genetics)veterinaryNot in File65446552J.Virol.6512James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, New YorkPM:1942246J.Virol.1(PARRISH et al. 1991c). Das Wirtsspektrum des CPV-2, das sich auf Hunde beschrnkte, wurde durch die neuen anitgenen Varianten erweitert. So besitzen diese die Fhigkeit sowohl Hunde als auch Katzen zu infizieren.
Neuere Studien berichten von weiteren antigenen Varianten. Eine dieser Varianten scheint sich in Vietnam und Taiwan bei Leopardenkatzen ADDIN REFMGR.CITE Ikeda2000109Predominance of canine parvovirus (CPV) in unvaccinated cat populations and emergence of new antigenic types of CPVs in catsJournal109Predominance of canine parvovirus (CPV) in unvaccinated cat populations and emergence of new antigenic types of CPVs in catsIkeda,Y.Mochizuki,M.Naito,R.Nakamura,K.Miyazawa,T.Mikami,T.Takahashi,E.2000/12/5Amino Acid SequenceanalysisAnimalsAntigenic VariationAntigens,ViralAsparagineCapsidCarnivoraCatsclassificationComparative StudyFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGlycineHemagglutination Inhibition TestsimmunologyJapanmicrobiologyMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePhylogenyPolymerase Chain ReactionResearch Support,Non-U.S.Gov'tTaiwanveterinaryVietnamvirologyNot in File1319Virology2781Department of Veterinary Microbiology, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, Bunkyo-ku, Tokyo, 113-8657, JapanPM:11112475Virology1Nakamura2004106A novel antigenic variant of Canine parvovirus from a Vietnamese dogJournal106A novel antigenic variant of Canine parvovirus from a Vietnamese dogNakamura,M.Tohya,Y.Miyazawa,T.Mochizuki,M.Phung,H.T.Nguyen,N.H.Huynh,L.M.Nguyen,L.T.Nguyen,P.N.Nguyen,P.V.Nguyen,N.P.Akashi,H.2004/11Amino Acid SubstitutionAnimalsAntibodies,MonoclonalCapsidCapsid ProteinsCatschemistryclassificationDogsEvolutiongeneticsHemagglutinationHemagglutination Inhibition TestsimmunologyJapanmicrobiologyParvovirusParvovirus,CanineResearch Support,Non-U.S.Gov'tveterinaryNot in File22612269Arch.Virol.14911Department of Veterinary Microbiology, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, The University of Tokyo, Tokyo, JapanPM:15503211Arch.Virol.1Miyazawa199919Isolation of feline parvovirus from peripheral blood mononuclear cells of cats in northern VietnamJournal19Isolation of feline parvovirus from peripheral blood mononuclear cells of cats in northern VietnamMiyazawa,T.Ikeda,Y.Nakamura,K.Naito,R.Mochizuki,M.Tohya,Y.Vu,D.Mikami,T.Takahashi,E.1999AnimalsAntibodies,ViralbloodCatsCell LineCoculture TechniquesFeline Panleukopeniaimmunologyisolation & purificationJapanLeukocytes,MononuclearmicrobiologyNeutralization TestsParvovirus,FelineResearch Support,Non-U.S.Gov'tveterinaryVietnamvirologyNot in File609612Microbiol.Immunol.436Department of Veterinary Microbiology, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, The University of Tokyo, Japan. ataka@hongo.ecc.u-tokyo.ac.jpPM:10480557Microbiol.Immunol.1Ikeda199912Serosurvey for selected virus infections of wild carnivores in Taiwan and VietnamJournal12Serosurvey for selected virus infections of wild carnivores in Taiwan and VietnamIkeda,Y.Miyazawa,T.Nakamura,K.Naito,R.Inoshima,Y.Tung,K.C.Lee,W.M.Chen,M.C.Kuo,T.F.Lin,J.A.Mikami,T.1999/7AnimalsAnimals,WildAntibodies,ViralbloodCaliciviridae InfectionsCalicivirus,FelineCarnivoraCatsEnzyme-Linked Immunosorbent AssayepidemiologyFeline PanleukopeniaFluorescent Antibody Technique,IndirectHerpesviridaeHerpesviridae InfectionsImmunodeficiency Virus,FelineimmunologyJapanLentivirus InfectionsmicrobiologyParvovirus,FelinePrevalenceResearch Support,Non-U.S.Gov'tSeroepidemiologic StudiesSpecific Pathogen-Free OrganismsTaiwanveterinaryVietnamVirus DiseasesNot in File578581J.Wildl.Dis.353Department of Veterinary Microbiology, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, The University of Tokyo, JapanPM:10479095J.Wildl.Dis.1(IKEDA et al. 1999; MIYAZAWA et al. 1999; IKEDA et al. 2000a; NAKAMURA et al. 2004a), eine andere in Italien in den Hundepopulationen auszubreiten ADDIN REFMGR.CITE Buonavoglia2001108Evidence for evolution of canine parvovirus type 2 in ItalyJournal108Evidence for evolution of canine parvovirus type 2 in ItalyBuonavoglia,C.Martella,V.Pratelli,A.Tempesta,M.Cavalli,A.Buonavoglia,D.Bozzo,G.Elia,G.Decaro,N.Carmichael,L.2001/12analysisAnimalsAntigens,ViralCapsidDiarrheaDNA PrimersDog DiseasesDogsEpitopesEvolutionEvolution,MoleculargeneticsimmunologyItalyParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CaninePolymorphism,Restriction Fragment LengthSequence Analysis,ProteinVariation (Genetics)veterinaryNot in File30213025J.Gen.Virol.82Pt 12Department of Animal Health and Well-being, Faculty of Veterinary Medicine of Bari, S.p. per Casamassima km 3, 70010 Valenzano, Bari, Italy. c.buonavoglia@veterinaria.uniba.itPM:11714979J.Gen.Virol.1Martella2004105A canine parvovirus mutant is spreading in ItalyJournal105A canine parvovirus mutant is spreading in ItalyMartella,V.Cavalli,A.Pratelli,A.Bozzo,G.Camero,M.Buonavoglia,D.Narcisi,D.Tempesta,M.Buonavoglia,C.2004/3analysisAnimalsAntigens,ViralCarnivoraDog DiseasesDogsepidemiologyGeographyHemagglutination Inhibition Testsisolation & purificationItalyMinkMutationParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineResearch Support,Non-U.S.Gov'ttransmissionveterinaryvirologyWolvesNot in File13331336J.Clin.Microbiol.423Department of Animal Health and Wellbeing, University of Bari, Bari, Italy. v.martella@veterinaria.uniba.itPM:15004112J.Clin.Microbiol.1(BUONAVOGLIA et al. 2001a; MARTELLA et al. 2004).
Grundlage fr die Unterschiede zwischen FPV und CPV sowie seinen antigenen Varianten bilden wenige Aminosurenaustausche im Viruskapsid (vgl. Punkt 2.10).
Pathogenese, Klinik und Pathologie einer Infektion mit CPV/ FPV
Die Infektion mit dem caninen Parvovirus fhrt zu einer schweren Allgemeinerkrankung, die eine hohe Mortalitt aufweist. Sie stellt eine zyklisch verlaufende Allgemeininfektion dar.
Das Virus wird oral aufgenommen und vermehrt sich in den ersten 1-3 Tagen zunchst in dem lymphatischen Gewebe des Nasopharynx, insbesondere den Tonsillen ADDIN REFMGR.CITE Csiza197121Pathogenesis of Feline Panleukopenia Virus in Susceptible Newborn Kittens I. Clinical Signs, Hematology, Serology, and VirologyJournal21Pathogenesis of Feline Panleukopenia Virus in Susceptible Newborn Kittens I. Clinical Signs, Hematology, Serology, and VirologyCsiza,C.K.Scott,F.W.De Lahunta,A.Gillespie,J.H.1971/6bloodFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusmicrobiologyveterinaryvirologyNot in File833837Infect.Immun.36Departments of Microbiology and Anatomy, New York State Veterinary College, Cornell University, Ithaca, New York 14850PM:16558063Infect.Immun.1Pollock198224Experimental canine parvovirus infection in dogsJournal24Experimental canine parvovirus infection in dogsPollock,R.V.1982/4analysisAnimalsAntibodies,ViralBody TemperatureDogsetiologyFecesHemagglutination Inhibition TestsimmunologyParvoviridaepathogenicityphysiopathologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tSpecific Pathogen-Free OrganismsVirus DiseasesNot in File103119Cornell Vet.722PM:6211333Cornell Vet.1Macartney198427Canine parvovirus enteritis 1: Clinical, haematological and pathological features of experimental infectionJournal27Canine parvovirus enteritis 1: Clinical, haematological and pathological features of experimental infectionMacartney,L.McCandlish,I.A.Thompson,H.Cornwell,H.J.1984/9/1AnimalsbloodBone MarrowDog DiseasesDogsEnteritisetiologyFecesIntestinesLeukocyte CountLymph NodesMitosisParvoviridae InfectionspathologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tSpleenThymus GlandveterinaryNot in File201210Vet.Rec.1159PM:6091317Vet.Rec.1Carman198216Successful experimental challenge of dogs with canine parvovirus-2Journal16Successful experimental challenge of dogs with canine parvovirus-2Carman,S.Povey,C.1982/1AnimalsbloodcomplicationsDog DiseasesDogsEnteritisetiologyFecesFemaleFoodimmunologyisolation & purificationMalemicrobiologyMucusParvoviridaeParvovirus,FelineResearch Support,Non-U.S.Gov'tsecretionStarvationveterinaryViral VaccinesVirus DiseasesNot in File3338Can.J.Comp Med.461PM:6280819Can.J.Comp Med.1(CSIZA et al. 1971c; CARMAN u. POVEY 1982; POLLOCK 1982; MACARTNEY et al. 1984c). In der nachfolgenden virmischen Phase gelangt das Virus zu den Zielorganen: Thymus, Knochenmark, Mesenteriallymphknoten, Milz, Peyersche Platten und Darmepithel ADDIN REFMGR.CITE Csiza197121Pathogenesis of Feline Panleukopenia Virus in Susceptible Newborn Kittens I. Clinical Signs, Hematology, Serology, and VirologyJournal21Pathogenesis of Feline Panleukopenia Virus in Susceptible Newborn Kittens I. Clinical Signs, Hematology, Serology, and VirologyCsiza,C.K.Scott,F.W.De Lahunta,A.Gillespie,J.H.1971/6bloodFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusmicrobiologyveterinaryvirologyNot in File833837Infect.Immun.36Departments of Microbiology and Anatomy, New York State Veterinary College, Cornell University, Ithaca, New York 14850PM:16558063Infect.Immun.1Carlson197742Feline Panleukipenia. I. Pathogenesis in germfree and specific pathogen-free catsJournal42Feline Panleukipenia. I. Pathogenesis in germfree and specific pathogen-free catsCarlson,J.H.Scott,F.W.Duncan,J.R.1977/1AnimalsCatsComparative StudyDiarrheaetiologyFeline PanleukopeniaGerm-Free LifeimmunologyIntestine,SmallpathologyPeyer's PatchesResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Specific Pathogen-Free OrganismsThymus GlandNot in File7988Vet.Pathol.141PM:139735Vet.Pathol.1Meunier198544Pathogenesis of canine parvovirus enteritis: sequential virus distribution and passive immunization studiesJournal44Pathogenesis of canine parvovirus enteritis: sequential virus distribution and passive immunization studiesMeunier,P.C.Cooper,B.J.Appel,M.J.Lanieu,M.E.Slauson,D.O.1985/11AnimalsDog DiseasesDogsEnteritisetiologyFluorescent Antibody TechniqueImmunization,Passiveisolation & purificationLymph NodesmicrobiologyParvoviridaeParvoviridae InfectionspathologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViremiaVirus ReplicationNot in File617624Vet.Pathol.226PM:3001996Vet.Pathol.1Macartney198427Canine parvovirus enteritis 1: Clinical, haematological and pathological features of experimental infectionJournal27Canine parvovirus enteritis 1: Clinical, haematological and pathological features of experimental infectionMacartney,L.McCandlish,I.A.Thompson,H.Cornwell,H.J.1984/9/1AnimalsbloodBone MarrowDog DiseasesDogsEnteritisetiologyFecesIntestinesLeukocyte CountLymph NodesMitosisParvoviridae InfectionspathologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tSpleenThymus GlandveterinaryNot in File201210Vet.Rec.1159PM:6091317Vet.Rec.1(CSIZA et al. 1971b; CARLSON et al. 1977; MACARTNEY et al. 1984b; MEUNIER et al. 1985b). Die Annahme, dass eine Infektion der Lymphozyten der Peyerschen Platten auch direkt via M-Zellen erfolgen knnte ADDIN REFMGR.CITE Carman198530Pathogenesis of canine parvovirus-2 in dogs: histopathology and antigen identification in tissuesJournal30Pathogenesis of canine parvovirus-2 in dogs: histopathology and antigen identification in tissuesCarman,P.S.Povey,R.C.1985/3analysisAnimalsAntigens,ViralDog DiseasesDogsImmunoenzyme TechniquesimmunologyLymph NodesLymphatic SystemParvoviridaeParvoviridae InfectionspathologyPeyer's PatchesResearch Support,Non-U.S.Gov'tveterinaryNot in File141150Res.Vet.Sci.382PM:2988090Res.Vet.Sci.1(CARMAN u. POVEY 1985), wurde durch Studien widerlegt, die den Beginn der Infektion primr in den pharyngealen Lymphozyten nachwiesen ADDIN REFMGR.CITE Peters19964Pathogenesis of the most recent variant of canine parvovirus (CPV-2b)Thesis/Dissertation4Pathogenesis of the most recent variant of canine parvovirus (CPV-2b)Peters,D.N.1996Not in FileIthaka, NYCornell Universitiy29(PETERS 1996). 3-5 Tage post infectionem infiziert das Virus die Epithelvorluferzellen in den Lieberkhnschen Krypten und es kommt zu einer massiven Zerstrung der Darmepithelzellen. Histopathologisch zeigt sich das typische Bild einer Zottenatrophie vor allem im Ileum und im Jejunum ADDIN REFMGR.CITE Macartney198427Canine parvovirus enteritis 1: Clinical, haematological and pathological features of experimental infectionJournal27Canine parvovirus enteritis 1: Clinical, haematological and pathological features of experimental infectionMacartney,L.McCandlish,I.A.Thompson,H.Cornwell,H.J.1984/9/1AnimalsbloodBone MarrowDog DiseasesDogsEnteritisetiologyFecesIntestinesLeukocyte CountLymph NodesMitosisParvoviridae InfectionspathologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tSpleenThymus GlandveterinaryNot in File201210Vet.Rec.1159PM:6091317Vet.Rec.1Cooper197937Canine viral enteritis. II. Morphologic lesions in naturally occurring parvovirus infectionJournal37Canine viral enteritis. II. Morphologic lesions in naturally occurring parvovirus infectionCooper,B.J.Carmichael,L.E.Appel,M.J.Greisen,H.1979/4AnimalsDog DiseasesDogsEnteritisIntestine,SmallLymph NodesNecrosisParvoviridaepathologySpleenveterinaryVirus DiseasesNot in File134144Cornell Vet.693PM:467076Cornell Vet.1(COOPER et al. 1979; MACARTNEY et al. 1984a). Histologisch lassen sich intranuklere Einschlusskrperchen nachweisen. Der Grad und die Schwere der Infektion sind zum Teil durch die Erneuerungsrate der intestinalen Epithelzellen bestimmt ADDIN REFMGR.CITE Carlson197741Feline panleukopenia. II. The relationship of intestinal mucosal cell proliferation rates to viral infection and development of lesionsJournal41Feline panleukopenia. II. The relationship of intestinal mucosal cell proliferation rates to viral infection and development of lesionsCarlson,J.H.Scott,F.W.1977/3AnimalsCatsComparative StudyFeline PanleukopeniaGerm-Free LifeIntestinal MucosaJejunummicrobiologypathologyResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Specific Pathogen-Free OrganismsNot in File173181Vet.Pathol.142PM:140499Vet.Pathol.1(CARLSON u. SCOTT 1977). Koinfektionen mit Darmparasiten oder Bakterien wie Rota- und Coronaviren sind mglich und verschlimmern den Krankheitsverlauf. Pathologisch-anatomisch ist eine akute katarrhalische bis fibrins-hmorrhagische Gastroenteritis nachweisbar.
Klinisch zeigen die Tiere vor allem starken, wssrig-blutigen Durchfall, hufiges Erbrechen sowie Anorexie, Fieber und Depression. Eine Infektion mit CPV und FPV kann jedoch auch mild oder subklinisch verlaufen ADDIN REFMGR.CITE Parrish198285Canine parvovirus infections in a colony of dogsJournal85Canine parvovirus infections in a colony of dogsParrish,C.R.Oliver,R.E.McNiven,R.1982/9AdultanalysisAnimalsAntibodies,ViralDog DiseasesDogsetiologyHemagglutination Inhibition TestsimmunologyMyocarditisParvoviridaeParvovirusveterinaryVirus DiseasesNot in File317324Vet.Microbiol.74PM:7179717Vet.Microbiol.1(PARRISH et al. 1982b). Obwohl CPV Zellen des Knochenmarks infiziert ADDIN REFMGR.CITE Macartney198428Canine parvovirus enteritis 2: PathogenesisJournal28Canine parvovirus enteritis 2: PathogenesisMacartney,L.McCandlish,I.A.Thompson,H.Cornwell,H.J.1984/11/3analysisAnimalsAntibodies,ViralAntigens,ViralbiosynthesisBone MarrowDog DiseasesDogsEnteritisFluorescent Antibody TechniqueHemagglutination Inhibition TestsHemagglutination TestsImmunoenzyme TechniquesimmunologyIntestinal MucosaIntestinesLymph NodesLymphatic SystemmicrobiologyParvoviridaeParvoviridae InfectionsResearch Support,Non-U.S.Gov'tveterinaryNot in File453460Vet.Rec.11518PM:6095514Vet.Rec.1Truyen199266Canine and feline host ranges of canine parvovirus and feline panleukopenia virus: distinct host cell tropisms of each virus in vitro and in vivoJournal66Canine and feline host ranges of canine parvovirus and feline panleukopenia virus: distinct host cell tropisms of each virus in vitro and in vivoTruyen,U.Parrish,C.R.1992/9AnimalsbloodBone MarrowCatsCell LineDNA ReplicationDna,ViralDogsFeline panleukopenia virusgrowth & developmentisolation & purificationLymphoid TissuemicrobiologyOrgan SpecificityParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinepathogenicityResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File53995408J.Virol.669James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:1323703J.Virol.1Meunier198544Pathogenesis of canine parvovirus enteritis: sequential virus distribution and passive immunization studiesJournal44Pathogenesis of canine parvovirus enteritis: sequential virus distribution and passive immunization studiesMeunier,P.C.Cooper,B.J.Appel,M.J.Lanieu,M.E.Slauson,D.O.1985/11AnimalsDog DiseasesDogsEnteritisetiologyFluorescent Antibody TechniqueImmunization,Passiveisolation & purificationLymph NodesmicrobiologyParvoviridaeParvoviridae InfectionspathologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViremiaVirus ReplicationNot in File617624Vet.Pathol.226PM:3001996Vet.Pathol.1(MACARTNEY et al. 1984d; MEUNIER et al. 1985a; TRUYEN u. PARRISH 1992a), kommt es bei Hunden im Vergleich mit einer FPV-Infektion bei Katzen eher zu einer relativen Lymphopenie. Urschlich dafr knnte sein, dass CPV und FPV unterschiedliche Zielzellen im Kochenmark infizieren ADDIN REFMGR.CITE Parrish20062Pathogenesis of feline panleukopenia virus and canine parvovirusBook Chapter2Pathogenesis of feline panleukopenia virus and canine parvovirusParrish,Colin R.2006Not in File42934ParvovirusesKerr,Jonathan R.Cotmore,Susan F.Bloom,Marshall E.Linden,MichaelParrish,Colin R.29LondonHodder Arnold3(PARRISH 2006). 4-6 Tage post infectionem beginnt die Ausscheidung des Virus ber den Kot.
Die Pathogenese sowie das klinische Erscheinungsbild stimmten weitgehend mit der Infektion von Katzen mit FPV berein. Pathologisch-anatomisch kommt es hier zu einer akuten katarrhalischen bis fibrinsen Enteritis. Der starke Befall der Stammzellen im Knochenmark fhrt zu einer Panleukopenie. Bei einer diaplazentaren Infektion der Katzenwelpen mit dem Virus kommt es zum klinischen Erscheinungsbild der felinen Ataxie ADDIN REFMGR.CITE Csiza197120Pathogenesis of Feline Panleukopenia Virus in Susceptible Newborn Kittens II. Pathology and ImmunofluorescenceJournal20Pathogenesis of Feline Panleukopenia Virus in Susceptible Newborn Kittens II. Pathology and ImmunofluorescenceCsiza,C.K.De Lahunta,A.Scott,F.W.Gillespie,J.H.1971/6AnimalsbloodFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusmicrobiologyveterinaryNot in File838846Infect.Immun.36Departments of Microbiology and Anatomy, New York State Veterinary College, Cornell University, Ithaca, New York 14850PM:16558064Infect.Immun.1Kilham197146Cerebellar ataxia and its congenital transmission in cats by feline panleukopenia virusJournal46Cerebellar ataxia and its congenital transmission in cats by feline panleukopenia virusKilham,L.Margolis,G.Colby,E.D.1971/3/15Abnormalitiesanatomy & histologyAnimalsAnimals,NewbornCarnivoraCarrier StateCat DiseasesCatsCell DivisionCerebellar AtaxiaCerebellumcomplicationscongenitalCricetinaeDNA VirusesembryologyFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusFemaleisolation & purificationMaternal-Fetal ExchangemicrobiologypathogenicitypathologyPregnancyRodent DiseasestransmissionveterinaryVirus DiseasesNot in FileSupplJ.Am.Vet.Med.Assoc.1586PM:5103504J.Am.Vet.Med.Assoc.1(KILHAM et al. 1971; CSIZA et al. 1971a). Klinisch zeigen die Katzen neben der Ataxie auch Hypermetrie und Koordinationsstrungen. Ursache ist eine durch das Virus hervorgerufene Kleinhirnhypoplasie.
Eine Infektion neugeborener Hundewelpen mit CPV kann eine cerebellre Erkrankung verursachen ADDIN REFMGR.CITE Schatzberg200347Polymerase chain reaction (PCR) amplification of parvoviral DNA from the brains of dogs and cats with cerebellar hypoplasiaJournal47Polymerase chain reaction (PCR) amplification of parvoviral DNA from the brains of dogs and cats with cerebellar hypoplasiaSchatzberg,S.J.Haley,N.J.Barr,S.C.Parrish,C.Steingold,S.Summers,B.A.deLahunta,A.Kornegay,J.N.Sharp,N.J.2003/7analysisAnimalsAnimals,NewbornBrainCase-Control StudiesCat DiseasesCatsCerebellar DiseasesCerebellumcongenitalDnaDNA PrimersDna,ViralDog DiseasesDogsetiologyFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsImmunohistochemistryParvoviridae InfectionsParvovirusPolymerase Chain ReactionPredictive Value of TestsResearch Support,Non-U.S.Gov'tstandardsveterinaryvirologyNot in File538544J.Vet.Intern.Med.174Department of Clinical Sciences, Cornell University Hospital for Animals, Cornell University, Ithaca, NY 14853-6401, USA. sjs53@cornell.eduPM:12892305J.Vet.Intern.Med.1(SCHATZBERG et al. 2003).
Charakteristisches Anzeichen einer frhen Infektion mit CPV bei Hundewelpen ist eine Myokarditis. Diese besondere Verlaufsform der caninen Parvovirose kann bei Infektion innerhalb der ersten Lebenstage bei immunologisch naiven Welpen auftreten. Es kommt zu kardialen Arrythmien, Dyspnoe und zum pltzlichen Tod der zwei bis acht Wochen alten Welpen ADDIN REFMGR.CITE Hayes197939Sudden death in young dogs with myocarditis caused by parvovirusJournal39Sudden death in young dogs with myocarditis caused by parvovirusHayes,M.A.Russell,R.G.Babiuk,L.A.1979/6/1AnimalsCanadaDeath,SuddenDog DiseasesDogsEnteritisetiologymortalityMyocarditisMyocardiumParvoviridaepathologyultrastructureveterinaryVirus DiseasesNot in File11971203J.Am.Vet.Med.Assoc.17411PM:438048J.Am.Vet.Med.Assoc.1(HAYES et al. 1979). Da die Myokardzellen zum Zeitpunkt der Infektion noch mitotisch aktiv sind, stellen sie aufgrund des Tropismus des Virus zu teilungaktiven Zellen ein Zielorgan dar. Es kommt zu multifokalen Nekrosen der Myokardzellen. Oft knnen histologisch intranuklere Einschlusskrperchen nachgewiesen werden. Die Lungen sind sekundr infolge der Herzschden demats verndert. Diese Verlaufsform kommt allerdings aufgrund der Durchseuchung der Populationen bzw. Impfungen und den damit vorhandenen maternalen Antikrpern nur noch selten vor.
Lebendimpfstoffe gegen das CPV wurden frhzeitig entwickelt. Aufgrund der engen Verwandtschaft zwischen FPV und CPV wurde anfangs ein attenuiertes FPV in hohen Dosen eingesetzt, das beim Hund eine Wirksamkeit zeigte. Spter erfolgte der Einsatz eines CPV-spezifischen Lebendimpfstoffes.
Erkrankungen durch Infektion mit CPV kommen meistens nur noch als Einzelerkrankungen vor. Insbesondere die Welpen erkranken, welche zum Zeitpunkt der Impfung hohe maternale Antikrpertiter aufweisen. Die noch vorhandenen Antikrper neutralisieren das Impfvirus, so dass es nicht zu einer durch das Impfvirus induzierten Immunitt kommen kann. Durch die Entwicklung wirksamer Lebendimpfstoffe konnte der seuchenhafte Charakter der Erkrankung wirksam bekmpft werden.
Taxonomie der Parvoviren
Die Familie der Parvoviridae (parvus (lat.) = klein) wird in zwei Subfamilien unterteilt. Die in der Subfamilie Densovirinae zusammengefassten Viren infizieren ausschlielich Arthropoden und sind veterinrmedizinisch ohne Bedeutung. Die Subfamilie der Parvovirinae reprsentiert alle Parvoviren, die bei Vertebraten vorkommen. Die Klassifizierung erfolgt in drei Genera: Dependovirus, Erythrovirus und Parvovirus. Viren des Genus Dependovirus bentigen fr ihrer Replikation sogenannte Helferviren wie z.B. Adeno- oder Herpesviren ADDIN REFMGR.CITE McPherson1982109Adeno-associated virus helper activity of adenovirus DNA binding proteinJournal109Adeno-associated virus helper activity of adenovirus DNA binding proteinMcPherson,R.A.Ginsberg,H.S.Rose,J.A.1982/11Adenoviruses,HumanAnimalsbiosynthesisCarrier ProteinsCell LineDependovirusDnaDNA-Binding ProteinsgeneticsHaplorhiniHela CellsHumansMutationphysiologyProteinsTemperatureViral ProteinsVirus ReplicationNot in File666673J.Virol.442PM:6292524J.Virol.1(MCPHERSON et al. 1982). Die Genera Erythrovirus und Parvovirus dagegen reprsentieren Viren, die keine Helferviren bentigen und daher auch als autonome Parvoviren bezeichnet werden. Im Genus Erythrovirus ist das fr den Menschen pathogene Parvovirus B19 klassifiziert. Dieses Virus zeichnet sich durch einen hohen Tropismus zu erythroiden Vorluferzellen aus. Das Genus Parvovirus reprsentiert alle tierpathogenen Parvoviren. Einen berblick der taxonomischen Einteilung gibt Tabelle 1.
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 1: Die Familie der Parvoviridae*
SubfamilieGenusSpeziesWirtParvovirinaeParvovirusMinute virus of mice (MVM)MausFeline panleukopenia virus
Stmme:
Feline panleukopenia virus
Canine parvovirus
Raccoon parvovirus
Mink enteritis virus (MEV)
Katze
Hund
Waschbr
NerzH-1 parvovirusNagerKilham rat virus (KVR)RatteLuIII virusMausMouse parvovirus 1 (MPV-1)MausPorcine parvovirusSchweinDependovirusAdeno-associated virus (AAV1-5)MenschAvian adeno-associated virus (AAAV)HuhnBovine adeno-associated virus (BAAV)RindDuck parvovirus (DPV)EnteGoose parvovirusGansCanine adeno-associated virus (CAAV)HundEquine adeno-associated virus (EAAV)PferdOvine adeno-associated virus (OAAV)SchafErythrovirusHuman parvovirus B19 MenschAmdovirusAleutian mink disease virus (AMDV)NerzBocavirusBovine parvovirus type 1 (BPV-1)RindCanine minute virus (CnMV)HundDensovirinaeDensovirus1Junonia coenia densovirusSchmetterlingIteravirus1Bombyx mori DensovirusSeidenspringerBrevidensovirusAedes aegypti DensovirusStechfliegePefudensovirusPeriplaneta fuliginosa DensovirusSchabe
Das Genus Parvovirus
Das canine Parvovirus (CPV-2), feline Panleukopenie-Virus (FPV) und eine weitere Anzahl FPV-hnlicher Viren wie das Nerz-Enteritis-Virus (MEV, mink enteritis virus), Marderhund-Parvovirus (RDPV, raccoon dog parvovirus), Waschbr-Parvovirus (RPV, raccoon parvovirus) und das Polarfuchs-Parvovirus (BFPV, blue fox parvovirus) fhren alle zu einem hnlichen Krankheitsbild bei der jeweiligen Spezies und weisen auf DNA-Ebene eine Homologie von ber 98% auf ADDIN REFMGR.CITE Parrish1991103Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and feline panleukopenia virus using infectious plasmid clonesJournal103Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and feline panleukopenia virus using infectious plasmid clonesParrish,C.R.1991/7analysisAnimalsBase SequenceCapsidCatsCell LineCloning,MolecularDnaDna,ViralDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsimmunologyisolation & purificationMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinePlasmidsRecombination,GeneticResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.ultrastructureveterinaryNot in File195205Virology1831James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:1647068Virology1Reed1988105Nucleotide sequence and genome organization of canine parvovirusJournal105Nucleotide sequence and genome organization of canine parvovirusReed,A.P.Jones,E.V.Miller,T.J.1988/1Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCapsidCloning,Moleculardiagnostic useDnaDNA Restriction EnzymesDna,ViralDogsGenes,ViralgeneticsmicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusProtein ConformationProteinsViral ProteinsNot in File266276J.Virol.621pdf jaDepartment of Molecular Genetics, SmithKline Beckman Corporation, Swedeland, Pennsylvania 19406PM:2824850J.Virol.1Martyn1990108Nucleotide sequence of feline panleukopenia virus: comparison with canine parvovirus identifies host-specific differencesJournal108Nucleotide sequence of feline panleukopenia virus: comparison with canine parvovirus identifies host-specific differencesMartyn,J.C.Davidson,B.E.Studdert,M.J.1990/11Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCapsidCapsid ProteinschemistryComparative StudyDnaDna,ViralDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenesGenes,ViralgeneticsmicrobiologyMolecular Sequence DataNucleic Acid ConformationParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinePlasmidsProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tRestriction MappingSequence Homology,Nucleic AcidVariation (Genetics)veterinaryNot in File27472753J.Gen.Virol.71 ( Pt 11)School of Veterinary Science, University of Melbourne, Parkville, Victoria, AustraliaPM:2174965J.Gen.Virol.1(REED et al. 1988; MARTYN et al. 1990; PARRISH 1991c).
Das canine minute virus (CnMV bzw. CPV-1; ADDIN REFMGR.CITE Binn19706Recovery and Characterization of a Minute Virus of CaninesJournal6Recovery and Characterization of a Minute Virus of CaninesBinn,L.N.Lazar,E.C.Eddy,G.A.Kajima,M.1970/5bloodCell LineDogsHeatKidneyMicemicrobiologyParvovirusveterinaryVirionNot in File503508Infect.Immun.15Department of Veterinary Microbiology, Walter Reed Army Institute of Research, Washington, D.C. 20012PM:16557766Infect.Immun.1(BINN et al. 1970)) wurde 1967 aus einem Hund isoliert und in die Subfamilie der Parvovirinae eingeordnet. Das als CPV-1 bezeichnete Virus weist zu dem spter entdeckten CPV-2 keine genetische hnlichkeit auf ADDIN REFMGR.CITE Macartney1988112Characterization of minute virus of canines (MVC) and its pathogenicity for pupsJournal112Characterization of minute virus of canines (MVC) and its pathogenicity for pupsMacartney,L.Parrish,C.R.Binn,L.N.Carmichael,L.E.1988/4analysisAnimalsDog DiseasesDogsmicrobiologyParvoviridaeParvoviridae InfectionsParvoviruspathogenicityResearch Support,Non-U.S.Gov'tveterinaryVirus CultivationNot in File131145Cornell Vet.782Department of Veterinary Pathology, University of Glasgow, Scotland, U.KPM:2836128Cornell Vet.1Mochizuki200223Virologic and serologic identification of minute virus of canines (canine parvovirus type 1) from dogs in JapanJournal23Virologic and serologic identification of minute virus of canines (canine parvovirus type 1) from dogs in JapanMochizuki,M.Hashimoto,M.Hajima,T.Takiguchi,M.Hashimoto,A.Une,Y.Roerink,F.Ohshima,T.Parrish,C.R.Carmichael,L.E.2002/11Amino Acid SequenceanalysisAnimalsAntibodies,ViralbloodCell LineclassificationDna,ViralDog DiseasesDogsepidemiologyEpidemiology,MoleculargeneticsimmunologyJapanmicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CaninePolymerase Chain ReactionSequence Analysis,DNAveterinaryvirologyVirus CultivationNot in File39933998J.Clin.Microbiol.4011Laboratory of Clinical Microbiology. Tsukuba Central Laboratories, Kyoritsu Seiyaku Corporation, Chiyoda-ku, Tokyo 102-0073, Japan. msmmchzk@mb.infoweb.ne.jpPM:12409364J.Clin.Microbiol.1(MACARTNEY et al. 1988; MOCHIZUKI et al. 2002) und ist eher verwandt mit dem bovinen Parvovirus Typ-1 ADDIN REFMGR.CITE Schwartz200222The canine minute virus (minute virus of canines) is a distinct parvovirus that is most similar to bovine parvovirusJournal22The canine minute virus (minute virus of canines) is a distinct parvovirus that is most similar to bovine parvovirusSchwartz,D.Green,B.Carmichael,L.E.Parrish,C.R.2002/10/25Amino Acid SequenceAnimalsCapsidCapsid ProteinsCattleCell LineclassificationCloning,MolecularDogsgeneticsGenome,ViralimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvovirusReverse Transcriptase Polymerase Chain ReactionSequence AlignmentSequence Analysis,DNAveterinaryViral Nonstructural ProteinsvirologyNot in File219223Virology3022James A. Baker Institute and Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY 14853, USAPM:12441065Virology1(SCHWARTZ et al. 2002). Das Virus wird mit Fruchtbarkeitsstrungen und Welpenerkrankungen in Zusammenhang gebracht ADDIN REFMGR.CITE Carmichael19911Pathogenicity of minute virus of canines (MVC) for the canine fetusJournal1Pathogenicity of minute virus of canines (MVC) for the canine fetusCarmichael,L.E.Schlafer,D.H.Hashimoto,A.1991/4AnimalsAntibodies,ViralbloodDog DiseasesDogsFemaleFetal DeathFetal DiseasesFetal ResorptionFluorescent Antibody TechniqueHemagglutination Inhibition TestsimmunologymicrobiologyParvoviridaeParvoviridae InfectionspathogenicityPregnancyPregnancy Complications,InfectiousResearch Support,Non-U.S.Gov'tSpecific Pathogen-Free OrganismsveterinaryNot in File151171Cornell Vet.812Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14850PM:1851474Cornell Vet.1Carmichael199471Minute virus of canines (MVC, canine parvovirus type-1): pathogenicity for pups and seroprevalence estimateJournal71Minute virus of canines (MVC, canine parvovirus type-1): pathogenicity for pups and seroprevalence estimateCarmichael,L.E.Schlafer,D.H.Hashimoto,A.1994/4analysisAnimalsAntibodies,ViralAntigens,ViralCell LinediagnosisDog DiseasesDogsFemaleFluorescent Antibody TechniqueHemagglutination Inhibition TestsimmunologyMalemicrobiologyParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CaninepathogenicityResearch Support,Non-U.S.Gov'tUnited StatesveterinaryVirus SheddingNot in File165174J.Vet.Diagn.Invest62Baker Institute for Animal Health, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY 14853PM:8068747J.Vet.Diagn.Invest1(CARMICHAEL et al. 1991; CARMICHAEL et al. 1994).
Morphologie
Parvoviren sind kleine unbehllte Viren, die im Durchschnitt 18-26nm gro sind. Aufgrund der fehlenden Hlle besitzen sie eine hohe Tenazitt in der Auenwelt. Das Virus ist bei pH-Werten zwischen pH 3 bis pH 9 und Temperaturen bis 56C stabil ADDIN REFMGR.CITE Siegl19855Characteristics and taxonomy of ParvoviridaeJournal5Characteristics and taxonomy of ParvoviridaeSiegl,G.Bates,R.C.Berns,K.I.Carter,B.J.Kelly,D.C.Kurstak,E.Tattersall,P.1985analysisBase SequenceclassificationDnaDna,ViralGenes,ViralgeneticsParvoviridaeNot in File6173Intervirology232PM:3980186Intervirology1(SIEGL et al. 1985).
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 1: elektronenmikroskopische Aufnahme des caninen Parvovirus
Das Genom ist von einem Kapsid umgeben, das sich aus 60 Kopien der Strukturproteine VP1 und VP2 zusammensetzt ADDIN REFMGR.CITE Tsao199144The three-dimensional structure of canine parvovirus and its functional implicationsJournal44The three-dimensional structure of canine parvovirus and its functional implicationsTsao,J.Chapman,M.S.Agbandje,M.Keller,W.Smith,K.Wu,H.Luo,M.Smith,T.J.Rossmann,M.G.Compans,R.W..1991/3/22Amino Acid SequenceAntigens,ViralCapsidchemistryCrystallographyDna,ViralHemagglutinins,ViralModels,MolecularMolecular Sequence DataMolecular StructureParvoviridaeParvovirusResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,Non-P.H.S.Research Support,U.S.Gov't,P.H.S.ultrastructureVirionVirus ReplicationX-Ray DiffractionNot in File14561464Science2515000Department of Biological Sciences, Purdue University, West Lafayette, IN 47907PM:2006420Science1(TSAO et al. 1991a). Diese liegen im Kapsid in einem Verhltnis von 1:10 vor. Aufgeklrt wurde die Kapsidstruktur von CPV-2 und FPV mit Hilfe der Rntgenstrukturanalyse ADDIN REFMGR.CITE Agbandje199372Structure determination of feline panleukopenia virus empty particlesJournal72Structure determination of feline panleukopenia virus empty particlesAgbandje,M.McKenna,R.Rossmann,M.G.Strassheim,M.L.Parrish,C.R.1993/6Amino Acid SequenceAnimalsAntigens,ViralCapsidCatsCells,CulturedchemistryDNA-Binding ProteinsDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHemagglutinationimmunologymetabolismMolecular Sequence DataNeutralization TestsParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelineProtein ConformationResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,Non-P.H.S.ultrastructureVirionX-Ray DiffractionNot in File155171Proteins162Department of Biological Sciences, Purdue University, West Lafayette, Indiana 47907PM:8392729Proteins1Govindasamy200317Structures of host range-controlling regions of the capsids of canine and feline parvoviruses and mutantsJournal17Structures of host range-controlling regions of the capsids of canine and feline parvoviruses and mutantsGovindasamy,L.Hueffer,K.Parrish,C.R.gbandje-McKenna,M.2003/11AnimalsBinding Sites,AntibodyCapsidCatschemistryDogsFeline PanleukopeniametabolismModels,MolecularMutationParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinephysiologyReceptors,TransferrinReceptors,VirusResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Not in File1221112221J.Virol.7722Department of Biochemistry and Molecular Biology, Center for Structural Biology, College of Medicine, University of Florida, Gainesville, Florida 32610, USAPM:14581558J.Virol.1Llamas-Saiz199643Structural analysis of a mutation in canine parvovirus which controls antigenicity and host rangeJournal43Structural analysis of a mutation in canine parvovirus which controls antigenicity and host rangeLlamas-Saiz,A.L.gbandje-McKenna,M.Parker,J.S.Wahid,A.T.Parrish,C.R.Rossmann,M.G.1996/11/1analysisAnimalsAntigens,ViralArginineAspartic AcidchemistryCrystallography,X-RayDNA ReplicationDogsEpitopesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsimmunologyMutationParvoviruspathogenicityPoint MutationProtein ConformationResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Virus ReplicationNot in File6571Virology2251Department of Biological Sciences, Purdue University, West Lafayette, Indiana 47907-1392, USAPM:8918534Virology1Simpson20002Host range and variability of calcium binding by surface loops in the capsids of canine and feline parvovirusesJournal2Host range and variability of calcium binding by surface loops in the capsids of canine and feline parvovirusesSimpson,A.A.Chandrasekar,V.Hebert,B.Sullivan,G.M.Rossmann,M.G.Parrish,C.R.2000/7/14Amino Acid SubstitutionAnimalsBinding SitesCalciumCapsidCatsCell LinechemistryCrystallizationCrystallography,X-Raydrug effectsEdetic AcidEndocytosisErythrocytesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsHemagglutinins,ViralHorsesHydrogen BondingHydrogen-Ion ConcentrationMacaca mulattametabolismModels,MolecularMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinepharmacologyPliabilityProtein BindingProtein ConformationResearch Support,Non-U.S.Gov'tStructure-Activity RelationshipTemperaturevirologyNot in File597610J.Mol.Biol.3003Department of Biological Sciences, Purdue University, West Lafayette, IN, 47907-1392, USAPM:10884355J.Mol.Biol.1Tsao199144The three-dimensional structure of canine parvovirus and its functional implicationsJournal44The three-dimensional structure of canine parvovirus and its functional implicationsTsao,J.Chapman,M.S.Agbandje,M.Keller,W.Smith,K.Wu,H.Luo,M.Smith,T.J.Rossmann,M.G.Compans,R.W..1991/3/22Amino Acid SequenceAntigens,ViralCapsidchemistryCrystallographyDna,ViralHemagglutinins,ViralModels,MolecularMolecular Sequence DataMolecular StructureParvoviridaeParvovirusResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,Non-P.H.S.Research Support,U.S.Gov't,P.H.S.ultrastructureVirionVirus ReplicationX-Ray DiffractionNot in File14561464Science2515000Department of Biological Sciences, Purdue University, West Lafayette, IN 47907PM:2006420Science1(TSAO et al. 1991b; AGBANDJE et al. 1993b; LLAMAS-SAIZ et al. 1996a; SIMPSON et al. 2000; GOVINDASAMY et al. 2003).
Die oberflchliche Struktur des Viruskapsids bildet einen Ikosaeder, der 20 Flchen und 12 Ecken besitzt. Auf die Flchen lassen sich 60 identische gleichseitige Dreiecke projizieren. Jede Dreiecksuntereinheit ist aus Teilen der Proteinkette des VP2 zusammengesetzt. Es wird ein fassfrmiges Faltungsmuster gebildet, das aus acht anitparallelen -Faltblattstrngen besteht. Die Verbindung dieser Strnge erfolgt durch groe ineinandergreifende Schleifen. Diese als loops bezeichneten Schleifen befinden sich auf der Kapsidoberflche und werden durch zahlreiche nichtkovalente Bindungen stabilisiert. Dadurch erklrt sich die hohe Stabilitt des Kapsids.
Durch die Anordnung der Dreiecke kommt es zur Ausbildung verschiedener Symmetrieachsen. Es werden 2x-Achsen, 3x-Achsen und 5x-Achsen unterschieden (Abb. 2).
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 2: Schematische Darstellung des strukturellen Aufbaus des Viruskapsids autonomer Parvoviren
Die 5x-Achse besitzt eine zylinderartige Form, ist hervorgehoben und von einer kreisfrmigen Vertiefung, dem sogenannten canyon, umgeben. Die 2x-Achse wird von einer Einkerbung durchzogen, die als dimple bezeichnet wird und die 3x-Achse bildet eine Erhebung den Three-fold-spike ADDIN REFMGR.CITE Agbandje199372Structure determination of feline panleukopenia virus empty particlesJournal72Structure determination of feline panleukopenia virus empty particlesAgbandje,M.McKenna,R.Rossmann,M.G.Strassheim,M.L.Parrish,C.R.1993/6Amino Acid SequenceAnimalsAntigens,ViralCapsidCatsCells,CulturedchemistryDNA-Binding ProteinsDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHemagglutinationimmunologymetabolismMolecular Sequence DataNeutralization TestsParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelineProtein ConformationResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,Non-P.H.S.ultrastructureVirionX-Ray DiffractionNot in File155171Proteins162Department of Biological Sciences, Purdue University, West Lafayette, Indiana 47907PM:8392729Proteins1(AGBANDJE et al. 1993a).
Eine weitere Struktur zwischen Canyon und Dimple am Rande des Three-fold-spike wird als Schulter des Dimple bezeichnet ADDIN REFMGR.CITE Strassheim199455Two dominant neutralizing antigenic determinants of canine parvovirus are found on the threefold spike of the virus capsidJournal55Two dominant neutralizing antigenic determinants of canine parvovirus are found on the threefold spike of the virus capsidStrassheim,M.L.Gruenberg,A.Veijalainen,P.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.1994/1AnimalsAntigenic VariationAntigens,ViralCapsidCapsid ProteinsCell LinechemistryDogsdrug effectsEnteritisEpitopesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsHemagglutinationImmunodominant EpitopesimmunologyMinkModels,MolecularMolecular Sequence DataMutationNeutralization TestsParvovirusParvovirus,CanineProtein DenaturationResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence Analysis,DNAVariation (Genetics)veterinaryNot in File175184Virology1981James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:8259653Virology1(STRASSHEIM et al. 1994d).
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 3: Kapsidstruktur (CPV/FPV) mit eingezeichneter Dreiecksuntereinheit ADDIN REFMGR.CITE Parrish20061Parvovirus host range, cell tropism and evolution - studies of canine and feline parvoviruses, minute virus of mice, porcine parvovirus, and Aleutian mink disease virusBook Chapter1Parvovirus host range, cell tropism and evolution - studies of canine and feline parvoviruses, minute virus of mice, porcine parvovirus, and Aleutian mink disease virusParrish,Colin R.Hueffer,Karsten2006Not in File343350ParvovirusesKerr,Jonathan R.Cotmore,Susan F.Bloom,Marshall E.Linden,MichaelParrish,Colin R.23LondonHodder Arnold3(PARRISH u. HUEFFER 2006)
Die Strukturen um den Three-fold-spike sind von besonderem Interesse. Studien ergaben, dass diese an den zellulren Transferrinrezeptor binden und fr die Kontrolle des Wirtsspektrums ausschlaggebend sind ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200319Parvovirus host range, cell tropism and evolutionJournal19Parvovirus host range, cell tropism and evolutionHueffer,K.Parrish,C.R.2003/8AnimalsCapsidDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgrowth & developmentimmunologyMicemicrobiologyParvoviridae InfectionsParvoviruspathogenicityphysiologyReceptors,Cell SurfaceResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryvirologyVirulenceNot in File392398Curr.Opin.Microbiol.64JA Baker Institute for Animal Health, Department of Microbiology Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY, USAPM:12941411Curr.Opin.Microbiol.1Palermo200320Residues in the apical domain of the feline and canine transferrin receptors control host-specific binding and cell infection of canine and feline parvovirusesJournal20Residues in the apical domain of the feline and canine transferrin receptors control host-specific binding and cell infection of canine and feline parvovirusesPalermo,L.M.Hueffer,K.Parrish,C.R.2003/8Amino Acid SequenceAmino Acid SubstitutionanalysisAnimalsCapsidCatsCell LinechemistryDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGlycosylationimmunologymetabolismmicrobiologyMolecular Sequence DataMutagenesis,Site-DirectedParvovirusParvovirus,CaninephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence Homology,Amino AcidveterinaryNot in File89158923J.Virol.7716James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:12885908J.Virol.1(PALERMO et al. 2003b; HUEFFER u. PARRISH 2003b).
Auf die Lage wichtiger Aminosuren bzw. Vernderungen von Aminosuren an den oben genannten Regionen bei FPV, CPV-2 und den neuen antigenen Varianten CPV-2a und 2b wird im Rahmen der Evolution des caninen Parvovirus ausfhrlich in Punkt 2.10 eingegangen.
Genomorganisation
Parvoviren besitzen ein einzelstrngiges lineares DNA-Genom von ungefhr 5000 Basen Lnge ADDIN REFMGR.CITE Cotmore19874The autonomously replicating parvoviruses of vertebratesJournal4The autonomously replicating parvoviruses of vertebratesCotmore,S.F.Tattersall,P.1987analysisAntigens,ViralCell CycleclassificationDNA ReplicationDna,ViralGene Expression RegulationGenes,ViralgeneticsimmunologyMorphogenesisNucleic Acid ConformationParvoviridaephysiologyProtein BiosynthesisResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Transcription,GeneticViral ProteinsVirus ReplicationNot in File91174Adv.Virus Res.33PM:3296697Adv.Virus Res.1(COTMORE u. TATTERSALL 1987). Das Genom codiert fr die Strukturproteine VP1 und VP2 sowie fr drei Nichtstrukturproteine (NS1, NS2 und NS3). Es sind zwei groe offene Leserahmen (open reading frame, ORF) vorhanden. Am 3-Ende des Genoms befindet sich der rechte ORF, der fr die Strukturproteine codiert. Die Informationen fr die Nichtstrukturproteine sind im linken ORF enthalten, der sich am 5-Ende befindet. Innerhalb des linken ORF ist ein weiterer kleinerer Leserahmen verankert.
Die Nichtstrukturproteine werden durch alternatives Spleien prozessiert, bei dem der gleiche Genomabschnitt in verschiedenen Leserastern abgelesen wird. Die gespleiten und ungespleiten Transkripte dienen als mRNA fr die anschlieende Translation. Die genetischen Informationen des VP2 sind vollstndig im VP1 enthalten. Damit eine mRNA fr das VP2 transkribiert wird, ist ein Splice-Schnitt erforderlich. Durch diesen erfolgt die Translation nicht vom ersten Startcodon sondern vom zweiten Startcodon aus ADDIN REFMGR.CITE Cotmore19874The autonomously replicating parvoviruses of vertebratesJournal4The autonomously replicating parvoviruses of vertebratesCotmore,S.F.Tattersall,P.1987analysisAntigens,ViralCell CycleclassificationDNA ReplicationDna,ViralGene Expression RegulationGenes,ViralgeneticsimmunologyMorphogenesisNucleic Acid ConformationParvoviridaephysiologyProtein BiosynthesisResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Transcription,GeneticViral ProteinsVirus ReplicationNot in File91174Adv.Virus Res.33PM:3296697Adv.Virus Res.1(COTMORE u. TATTERSALL 1987). Findet die Translation vom ersten Startcodon aus statt, entsteht das am aminoterminalen Ende um 143 Aminosuren lngere VP1. Ein drittes als VP3 bezeichnetes Protein entsteht durch proteolytische Spaltung des VP2 am aminoterminalen Ende ADDIN REFMGR.CITE Tullis1992101The trypsin-sensitive RVER domain in the capsid proteins of minute virus of mice is required for efficient cell binding and viral infection but not for proteolytic processing in vivoJournal101The trypsin-sensitive RVER domain in the capsid proteins of minute virus of mice is required for efficient cell binding and viral infection but not for proteolytic processing in vivoTullis,G.E.Burger,L.R.Pintel,D.J.1992/12Amino Acid SequenceanalysisBinding SitesCapsidCapsid ProteinsCells,CulturedchemistryDNA Mutational AnalysisDNA Replicationdrug effectsimmunologymetabolismMiceMice Minute VirusmicrobiologyMolecular Sequence DataMutagenesisMutationParvoviruspathogenicitypharmacologyProtein Processing,Post-TranslationalResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Structure-Activity RelationshipTrypsinVirulenceNot in File846857Virology1912Department of Molecular Microbiology and Immunology, University of Missouri, Columbia School of Medicine 65212PM:1448928Virology1(TULLIS et al. 1992). Die Funktion ist nicht genau geklrt.
Das Spleien und das Ablesen des Genoms in verschiedenen Leserastern ermglichen den Parvoviren ihre gesamte Erbinformation auf dem sehr kleinen Genom unterzubringen. ADDIN REFMGR.CITE Parrish1990110Emergence, natural history, and variation of canine, mink, and feline parvovirusesJournal110Emergence, natural history, and variation of canine, mink, and feline parvovirusesParrish,C.R.1990AnimalsAntigenic VariationCat DiseasesCatsDog DiseasesDogsgeneticsHumansimmunologymicrobiologyMinkParvoviridaeParvoviridae InfectionsRodent DiseasesveterinaryNot in File403450Adv.Virus Res.38James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:2171302Adv.Virus Res.1(PARRISH 1990a).
Die Funktion der Nichtstrukturproteine ist noch nicht eindeutig geklrt. Am meisten ist ber das NS1 bekannt, das eine Nickase-, Helikase- und ATPase Aktivitt besitzt und bei der Replikation wichtig fr die Auflsung der sogenannten hairpin-Strukturen ist ADDIN REFMGR.CITE Wilson19915Expression of minute virus of mice major nonstructural protein in insect cells: purification and identification of ATPase and helicase activitiesJournal5Expression of minute virus of mice major nonstructural protein in insect cells: purification and identification of ATPase and helicase activitiesWilson,G.M.Jindal,H.K.Yeung,D.E.Chen,W.Astell,C.R.1991/11Adenosine TriphosphateAdenosinetriphosphataseAmino Acid SequenceAnimalsAntibodies,MonoclonalBaculoviridaeCapsidCell Linechemical synthesisChromatography,AffinityCloning,MolecularDeoxyadenine NucleotidesElectrophoresis,Polyacrylamide GelenzymologyGenes,ViralgeneticsimmunologyInsectsisolation & purificationmetabolismMiceMice Minute VirusMolecular Sequence DataMolecular WeightMultienzyme ComplexesPeptidesPlasmidsRecombinant ProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tSubstrate SpecificityTransfectionViral Core ProteinsViral Nonstructural ProteinsvirologyNot in File9098Virology1851Department of Biochemistry, Faculty of Medicine, University of British Columbia, Vancouver, CanadaPM:1833878Virology1(WILSON et al. 1991). Das NS2 ist am Besten bei dem Minute Virus of Mice untersucht worden, bei dem es eine entscheidende Rolle fr eine effiziente Translation spielt ADDIN REFMGR.CITE Naeger1993103NS2 is required for efficient translation of viral mRNA in minute virus of mice-infected murine cellsJournal103NS2 is required for efficient translation of viral mRNA in minute virus of mice-infected murine cellsNaeger,L.K.Salome,N.Pintel,D.J.1993/2analysisAnimalsbiosynthesisCapsidCapsid ProteinsCell DeathCell LineComparative StudyDNA,Recombinantdrug effectsFibroblastsgeneticsHumansimmunologyMiceMice Minute VirusmicrobiologyParvoviruspathogenicitypharmacologyProtein BiosynthesisResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.RNA,MessengerRna,ViralTransfectionViral Nonstructural ProteinsViral ProteinsVirulenceVirus ReplicationNot in File10341043J.Virol.672Department of Molecular Microbiology and Immunology, School of Medicine, University of Missouri, Columbia 65212PM:8419637J.Virol.1(NAEGER et al. 1993). Ebenso wird es bei der Kapsidbildung bentigt ADDIN REFMGR.CITE Cotmore19972The NS2 polypeptide of parvovirus MVM is required for capsid assembly in murine cellsJournal2The NS2 polypeptide of parvovirus MVM is required for capsid assembly in murine cellsCotmore,S.F.D'Abramo,A.M.,Jr.Carbonell,L.F.Bratton,J.Tattersall,P.1997/5/12Amino Acid SequenceAnimalsAntigens,ViralBase SequencebiosynthesisCapsidchemistryDna,Viralgeneticsgrowth & developmentHumansMiceMice Minute VirusMolecular Sequence DataMorphogenesisMutagenesis,Site-DirectedphysiologyResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityTransfectionultrastructureViral Nonstructural ProteinsVirus ReplicationNot in File267280Virology2312Department of Laboratory Medicine, Yale University School of Medicine, New Haven, Connecticut 06510, USAPM:9168889Virology1Cotmore19972The NS2 polypeptide of parvovirus MVM is required for capsid assembly in murine cellsJournal2The NS2 polypeptide of parvovirus MVM is required for capsid assembly in murine cellsCotmore,S.F.D'Abramo,A.M.,Jr.Carbonell,L.F.Bratton,J.Tattersall,P.1997/5/12Amino Acid SequenceAnimalsAntigens,ViralBase SequencebiosynthesisCapsidchemistryDna,Viralgeneticsgrowth & developmentHumansMiceMice Minute VirusMolecular Sequence DataMorphogenesisMutagenesis,Site-DirectedphysiologyResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityTransfectionultrastructureViral Nonstructural ProteinsVirus ReplicationNot in File267280Virology2312Department of Laboratory Medicine, Yale University School of Medicine, New Haven, Connecticut 06510, USAPM:9168889Virology1(COTMORE et al. 1997a; COTMORE et al. 1997b).
Die Strukturproteine VP1 und VP2 bilden die Oberflche des Kapsids und besitzen eine besondere Bedeutung im Hinblick auf das Wirtszellspektrum (vgl. Punkt 2.9). Insbesondere das VP2 bestimmt neben der Wirtsspezifitt auch andere biologische Unterschiede bei verschiedenen Parvoviren. Ein Austausch weniger Aminosuren in diesem Strukturprotein ist dafr verantwortlich, dass sich genetische und antigene Eigenschaften verndern ADDIN REFMGR.CITE Parrish199161Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirusJournal61Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirusParrish,C.R.Aquadro,C.F.Strassheim,M.L.Evermann,J.F.Sgro,J.Y.Mohammed,H.O.1991/12Amino Acid SequenceanalysisAnimalsAntibodies,MonoclonalAntigens,ViralBase SequenceCapsidCatsCell LineDna,ViralDogsEvolutionGenes,Viralgeneticsimmunologyisolation & purificationMolecular Sequence DataMutationParvoviridaeParvovirusPhylogenyResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Restriction MappingultrastructureVariation (Genetics)veterinaryNot in File65446552J.Virol.6512James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, New YorkPM:1942246J.Virol.1Truyen199547Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal47Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMinkMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinePhylogenyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(PARRISH et al. 1991b; TRUYEN et al. 1995c).
Replikation
Die Replikation der Parvoviren ist abhngig von der S-Phase der Wirtszelle, da die Viren auf zellulre Replikationskationsmechanismen angewiesen sind. Whrend der S-Phase in der Mitose werden DNA-Polymerasen exprimiert, welche fr die Synthese des komplementren Stranges zur Doppelstrang-DNA des Virus bentigt werden. Parvoviren besitzen deshalb einen ausgeprgten Tropismus zu mitotisch aktiven Zellen. Die Viruskapside binden an den Transferrinrezeptor und gelangen relativ schnell in die Zelle mit einem anschlieenden langsameren Transport innerhalb des endosomalen Systems ADDIN REFMGR.CITE Parker200034Cellular uptake and infection by canine parvovirus involves rapid dynamin-regulated clathrin-mediated endocytosis, followed by slower intracellular traffickingJournal34Cellular uptake and infection by canine parvovirus involves rapid dynamin-regulated clathrin-mediated endocytosis, followed by slower intracellular traffickingParker,J.S.Parrish,C.R.2000/2Adenoviruses,CanineAnimalsantagonists & inhibitorsAnti-Bacterial AgentsAntibodies,ViralBiological TransportCapsidCatsCell CycleCell LineCell MembraneCell Membrane PermeabilityCell NucleusClathrinCoated Pits,Cell-MembraneDextransDogsDynaminsEndocytosisEndoribonucleasesEnzyme InhibitorsFungal ProteinsGTP PhosphohydrolasesimmunologyIntracellular FluidMacrolidesmetabolismMicroscopy,ElectronMinkMutagenesisNeutralization TestsParvovirusParvovirus,CaninepharmacologyphysiologyProton-Translocating ATPasesResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Time FactorsTransferrinultrastructureveterinaryVirionvirologyVirus ReplicationNot in File19191930J.Virol.744James A. Baker Institute for Animal Health, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:10644365J.Virol.1Vihinen-Ranta200033Cytoplasmic trafficking of the canine parvovirus capsid and its role in infection and nuclear transportJournal33Cytoplasmic trafficking of the canine parvovirus capsid and its role in infection and nuclear transportVihinen-Ranta,M.Yuan,W.Parrish,C.R.2000/5AnimalsAntibodies,ViralCapsidCell LineCell NucleusCytoplasmDogsEndocytosisimmunologymetabolismNocodazoleParvovirusParvovirus,CaninepharmacologyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryvirologyVirus ReplicationNot in File48534859J.Virol.7410James A. Baker Institute for Animal Health, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:10775624J.Virol.1Vihinen-Ranta200226The VP1 N-terminal sequence of canine parvovirus affects nuclear transport of capsids and efficient cell infectionJournal26The VP1 N-terminal sequence of canine parvovirus affects nuclear transport of capsids and efficient cell infectionVihinen-Ranta,M.Wang,D.Weichert,W.S.Parrish,C.R.2002/2Amino Acid SequenceAnimalsAntibodies,MonoclonalAntibodies,ViralCapsidCatsCattleCell LineCell NucleuschemistrycytologyDogsgeneticsHeatimmunologyKidneymetabolismMiceMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CaninepathogenicitypharmacologyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.UreaveterinaryvirologyVirus ReplicationNot in File18841891J.Virol.764James A. Baker Institute for Animal Health, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:11799183J.Virol.1(VIHINEN-RANTA et al. 2000; PARKER u. PARRISH 2000; VIHINEN-RANTA et al. 2002).
Die im Zellkern stattfindende DNA-Replikation wird mit einem rolling-hairpin-Modell erklrt ADDIN REFMGR.CITE Cotmore19874The autonomously replicating parvoviruses of vertebratesJournal4The autonomously replicating parvoviruses of vertebratesCotmore,S.F.Tattersall,P.1987analysisAntigens,ViralCell CycleclassificationDNA ReplicationDna,ViralGene Expression RegulationGenes,ViralgeneticsimmunologyMorphogenesisNucleic Acid ConformationParvoviridaephysiologyProtein BiosynthesisResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Transcription,GeneticViral ProteinsVirus ReplicationNot in File91174Adv.Virus Res.33PM:3296697Adv.Virus Res.1Cotmore19954The NS1 polypeptide of the murine parvovirus minute virus of mice binds to DNA sequences containing the motif [ACCA]2-3Journal4The NS1 polypeptide of the murine parvovirus minute virus of mice binds to DNA sequences containing the motif [ACCA]2-3Cotmore,S.F.Christensen,J.Nuesch,J.P.Tattersall,P.1995/3Adenosine TriphosphateBase SequenceDnaDNA-Binding ProteinsGene Expression Regulation,ViralgeneticsmetabolismMiceMice Minute VirusMolecular Sequence DataOligodeoxyribonucleotidesRegulatory Sequences,Nucleic AcidResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Structure-Activity RelationshipViral Nonstructural ProteinsVirus ReplicationNot in File16521660J.Virol.693Department of Laboratory Medicine, Yale University School of Medicine, New Haven, Connecticut 06510PM:7853501J.Virol.1(COTMORE u. TATTERSALL 1987; COTMORE et al. 1995). Besondere Bedeutung besitzen die palindromischen Sequenzen, die sich am 3- und 5-Ende des Genoms befinden. Diese auch als ITR-Regionen (inverted terminal repeats) bezeichneten Strukturen ADDIN REFMGR.CITE Astell19851Sequence analysis of the termini of virion and replicative forms of minute virus of mice DNA suggests a modified rolling hairpin model for autonomous parvovirus DNA replicationJournal1Sequence analysis of the termini of virion and replicative forms of minute virus of mice DNA suggests a modified rolling hairpin model for autonomous parvovirus DNA replicationAstell,C.R.Chow,M.B.Ward,D.C.1985/4AnimalsBase SequenceDnaDNA ReplicationDna,ViralgeneticsMiceParvoviridaeResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Virus ReplicationNot in File171177J.Virol.541PM:3973977J.Virol.1(ASTELL et al. 1985) bilden Y- (3-Ende) bzw. T-frmige (5-Ende) doppelstrngige Sekundrstrukturen aus. Der hairpin am 3-Ende dient der DNA-Polymerase als Primer. Die Synthese erfolgt in Richtung 5-Ende mit anschlieender Ligation zum geschlossenen Genom. Durch die Nickase-Aktivitt des NS1-Proteins wird das Genom an einer sequenzspezifischen Stelle wieder aufgespalten und die DNA-Synthese wird entlang der Matrize fortgesetzt. Auf diese Weise entsteht ein doppelstrngiges DNA-Molekl doppelter Genomlnge. Dieses wird in zwei intermedire Formen getrennt, die am 5-Ende verlngert werden. Eines dieser beiden Intermediate kann fr einen weiteren Replikationszyklus eingesetzt werden. Das andere liefert den Minus-Strang, der in das Viruskapsid verpackt wird (s.Abb.4).
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 4: Replikation autonomer Parvoviren. Modifiziert nach ADDIN REFMGR.CITE Cotmore19874The autonomously replicating parvoviruses of vertebratesJournal4The autonomously replicating parvoviruses of vertebratesCotmore,S.F.Tattersall,P.1987analysisAntigens,ViralCell CycleclassificationDNA ReplicationDna,ViralGene Expression RegulationGenes,ViralgeneticsimmunologyMorphogenesisNucleic Acid ConformationParvoviridaephysiologyProtein BiosynthesisResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Transcription,GeneticViral ProteinsVirus ReplicationNot in File91174Adv.Virus Res.33PM:3296697Adv.Virus Res.1(COTMORE u. TATTERSALL 1987)
Wirtsspektren von CPV und FPV
Das Wirtsspektrum von CPV und FPV in vivo und in vitro ist sehr unterschiedlich. In felinen Zelllinien repliziert FPV in vitro und infiziert Katzen in vivo. In caninen Zelllinien erfolgt keine Replikation. Bei Hunden, die mit FPV experimentell infiziert wurden, erfolgt eine Replikation im Thymus und im Knochenmark ohne Krankheitsanzeichen ADDIN REFMGR.CITE Truyen199266Canine and feline host ranges of canine parvovirus and feline panleukopenia virus: distinct host cell tropisms of each virus in vitro and in vivoJournal66Canine and feline host ranges of canine parvovirus and feline panleukopenia virus: distinct host cell tropisms of each virus in vitro and in vivoTruyen,U.Parrish,C.R.1992/9AnimalsbloodBone MarrowCatsCell LineDNA ReplicationDna,ViralDogsFeline panleukopenia virusgrowth & developmentisolation & purificationLymphoid TissuemicrobiologyOrgan SpecificityParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinepathogenicityResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File53995408J.Virol.669James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:1323703J.Virol.1(TRUYEN u. PARRISH 1992b). Im Gegensatz dazu erfolgt bei CPV-2 in vivo eine Replikation nur im Hund ADDIN REFMGR.CITE Parrish199074Emergence, natural history, and variation of canine, mink, and feline parvovirusesJournal74Emergence, natural history, and variation of canine, mink, and feline parvovirusesParrish,C.R.1990AnimalsAntigenic VariationCat DiseasesCatsDog DiseasesDogsgeneticsHumansimmunologymicrobiologyMinkParvoviridaeParvoviridae InfectionsRodent DiseasesveterinaryNot in File403450Adv.Virus Res.38James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:2171302Adv.Virus Res.1Truyen199266Canine and feline host ranges of canine parvovirus and feline panleukopenia virus: distinct host cell tropisms of each virus in vitro and in vivoJournal66Canine and feline host ranges of canine parvovirus and feline panleukopenia virus: distinct host cell tropisms of each virus in vitro and in vivoTruyen,U.Parrish,C.R.1992/9AnimalsbloodBone MarrowCatsCell LineDNA ReplicationDna,ViralDogsFeline panleukopenia virusgrowth & developmentisolation & purificationLymphoid TissuemicrobiologyOrgan SpecificityParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinepathogenicityResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File53995408J.Virol.669James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:1323703J.Virol.1(PARRISH 1990b; TRUYEN u. PARRISH 1992c). In vitro allerdings repliziert CPV-2 sowohl in felinen als auch in caninen Zelllinien.
Mit Hilfe von monoklonalen Antikrpern wurden die neuen antigenen Varianten CPV-2a und 2b bestimmt ADDIN REFMGR.CITE Parrish199170Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirusJournal70Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirusParrish,C.R.Aquadro,C.F.Strassheim,M.L.Evermann,J.F.Sgro,J.Y.Mohammed,H.O.1991/12Amino Acid SequenceanalysisAnimalsAntibodies,MonoclonalAntigens,ViralBase SequenceCapsidCatsCell LineDna,ViralDogsEvolutionGenes,Viralgeneticsimmunologyisolation & purificationMolecular Sequence DataMutationParvoviridaeParvovirusPhylogenyResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Restriction MappingultrastructureVariation (Genetics)veterinaryNot in File65446552J.Virol.6512James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, New YorkPM:1942246J.Virol.1Parrish198582Natural variation of canine parvovirusJournal82Natural variation of canine parvovirusParrish,C.R.O'Connell,P.H.Evermann,J.F.Carmichael,L.E.1985/11/29analysisAnimalsAntigens,ViralDna,ViralDog DiseasesDogsgeneticsimmunologymicrobiologyParvoviridaeParvovirusResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.United StatesVariation (Genetics)Virus ReplicationNot in File10461048Science2304729PM:4059921Science1(PARRISH et al. 1985b; PARRISH et al. 1991a). CPV-2a weist zwei von CPV-2 abweichende Epitope auf. ADDIN REFMGR.CITE Strassheim199461Two dominant neutralizing antigenic determinants of canine parvovirus are found on the threefold spike of the virus capsidJournal61Two dominant neutralizing antigenic determinants of canine parvovirus are found on the threefold spike of the virus capsidStrassheim,M.L.Gruenberg,A.Veijalainen,P.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.1994/1AnimalsAntigenic VariationAntigens,ViralCapsidCapsid ProteinsCell LinechemistryDogsdrug effectsEnteritisEpitopesFeline panleukopenia virusgeneticsImmunodominant EpitopesimmunologyMinkModels,MolecularMolecular Sequence DataMutationNeutralization TestsParvovirusParvovirus,CanineProtein DenaturationResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence Analysis,DNAVariation (Genetics)veterinaryNot in File175184Virology1981James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:8259653Virology1(STRASSHEIM et al. 1994c). Diese befinden sich in drei separaten Regionen auf oder um den Three-fold-spike. Wie unter Punkt 2.10 beschrieben wird, resultieren die Unterschiede zwischen den Varianten aus nur wenigen Aminosurenunterschieden im Kapsidprotein. Durch diese Vernderungen gewannen die neuen antigenen Varianten die Fhigkeit, in Katzen zu replizieren ADDIN REFMGR.CITE Truyen199649Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeJournal49Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeTruyen,U.Evermann,J.F.Vieler,E.Parrish,C.R.1996/1/15analysisAnimalsAntigens,ViralBase SequenceCapsidCat DiseasesCatsclassificationDna,ViralDogsEvolutionFeline panleukopenia virusgeneticsGermanyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePhylogenyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryvirologyNot in File186189Virology2152Institute for Medical Microbiology, Ludwig Maximillians University, Munich, GermanyPM:8560765Virology1(TRUYEN et al. 1996a).
Dass Katzen nicht nur nach experimenteller Infektion mit CPV-2a erkranken, sondern dass diese Variante in verschiedenen Katzenpopulationen vorkommt, zeigen Untersuchungen von erkrankten Katzen in Asien, Deutschland und USA. Bei ca. 5% der untersuchten Katzen wurde CPV-2a nachgewiesen ADDIN REFMGR.CITE Ikeda2000109Predominance of canine parvovirus (CPV) in unvaccinated cat populations and emergence of new antigenic types of CPVs in catsJournal109Predominance of canine parvovirus (CPV) in unvaccinated cat populations and emergence of new antigenic types of CPVs in catsIkeda,Y.Mochizuki,M.Naito,R.Nakamura,K.Miyazawa,T.Mikami,T.Takahashi,E.2000/12/5Amino Acid SequenceanalysisAnimalsAntigenic VariationAntigens,ViralAsparagineCapsidCarnivoraCatsclassificationComparative StudyFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGlycineHemagglutination Inhibition TestsimmunologyJapanmicrobiologyMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePhylogenyPolymerase Chain ReactionResearch Support,Non-U.S.Gov'tTaiwanveterinaryVietnamvirologyNot in File1319Virology2781Department of Veterinary Microbiology, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, Bunkyo-ku, Tokyo, 113-8657, JapanPM:11112475Virology1Truyen199649Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeJournal49Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeTruyen,U.Evermann,J.F.Vieler,E.Parrish,C.R.1996/1/15analysisAnimalsAntigens,ViralBase SequenceCapsidCat DiseasesCatsclassificationDna,ViralDogsEvolutionFeline panleukopenia virusgeneticsGermanyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePhylogenyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryvirologyNot in File186189Virology2152Institute for Medical Microbiology, Ludwig Maximillians University, Munich, GermanyPM:8560765Virology1Ikeda20027Feline host range of canine parvovirus: recent emergence of new antigenic types in catsJournal7Feline host range of canine parvovirus: recent emergence of new antigenic types in catsIkeda,Y.Nakamura,K.Miyazawa,T.Takahashi,E.Mochizuki,M.2002/4Amino Acid SequenceAnimalsAnimals,WildAntibodies,MonoclonalAntigenic VariationAntigens,ViralCat DiseasesCatsclassificationCommunicable Diseases,EmergingComparative StudyDisease ReservoirsepidemiologyEvolution,MolecularFeline panleukopenia virusgeneticsimmunologyisolation & purificationParvoviridae InfectionsParvovirus,CaninePhylogenyphysiologyPrevalenceTerminologytransmissionveterinaryvirologyNot in File341346Emerg.Infect.Dis.84University College London, London, UK. ikedayasuhiro@hotmail.comPM:11971764Emerg.Infect.Dis.1Mochizuki19936Antigenic and genomic variabilities among recently prevalent parvoviruses of canine and feline origin in JapanJournal6Antigenic and genomic variabilities among recently prevalent parvoviruses of canine and feline origin in JapanMochizuki,M.Harasawa,R.Nakatani,H.1993/12analysisAnimalsAntigenic VariationAntigens,ViralBase SequenceCapsidCat DiseasesCatsCell LinechemistryComparative StudyDnaDNA PrimersDna,ViralDog DiseasesDogsepidemiologyGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentHemagglutination Inhibition TestsimmunologyJapanmicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirus,CanineParvovirus,FelinePolymerase Chain ReactionPrevalenceRestriction MappingSpecies SpecificitytransmissionVariation (Genetics)veterinaryNot in File110Vet.Microbiol.381-2Department of Veterinary Medicine, Faculty of Agriculture, Kagoshima University, JapanPM:8128593Vet.Microbiol.1(MOCHIZUKI et al. 1993; TRUYEN et al. 1996b; IKEDA et al. 2000b; IKEDA et al. 2002). Ebenso sind auch Wildtiere fr die neuen anitgenen Varianten CPV-2a und 2b empfnglich. Vor allem Grokatzen, bei denen klinische Symptome einer Parvovirusinfektion festgestellt wurden, waren mit CPV-2a oder 2b infiziert ADDIN REFMGR.CITE Steinel200123Parvovirus infections in wild carnivoresJournal23Parvovirus infections in wild carnivoresSteinel,A.Parrish,C.R.Bloom,M.E.Truyen,U.2001/7AnimalsAnimals,WildCarnivoraCatsclassificationDisease SusceptibilityDogsepidemiologyEvolutionFeline panleukopenia virusgeneticsParvoviridae InfectionsParvovirusPhylogenyphysiopathologyprevention & controlResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.VaccinationveterinaryNot in File594607J.Wildl.Dis.373Institute for Medical Microbiology, Infectious and Epidemic Diseases, University of Munich, GermanyPM:11504234J.Wildl.Dis.1(STEINEL et al. 2001).
In den Hundepopulationen wurde der ursprngliche Typ CPV-2 durch die neuen antigenen Varianten CPV-2a und 2b vollstndig verdrngt ADDIN REFMGR.CITE Parrish198582Natural variation of canine parvovirusJournal82Natural variation of canine parvovirusParrish,C.R.O'Connell,P.H.Evermann,J.F.Carmichael,L.E.1985/11/29analysisAnimalsAntigens,ViralDna,ViralDog DiseasesDogsgeneticsimmunologymicrobiologyParvoviridaeParvovirusResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.United StatesVariation (Genetics)Virus ReplicationNot in File10461048Science2304729PM:4059921Science1Parrish198876The global spread and replacement of canine parvovirus strainsJournal76The global spread and replacement of canine parvovirus strainsParrish,C.R.Have,P.Foreyt,W.J.Evermann,J.F.Senda,M.Carmichael,L.E.1988/5AnimalsCapsidCarnivoraclassificationComparative StudyDisease ReservoirsEuropegeneticsimmunologyisolation & purificationJapanmicrobiologyParvoviridaeParvoviridae InfectionsParvovirusResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.United StatesveterinaryViral VaccinesNot in File11111116J.Gen.Virol.69 ( Pt 5)James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:2836554J.Gen.Virol.1Parrish199172Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and feline panleukopenia virus using infectious plasmid clonesJournal72Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and feline panleukopenia virus using infectious plasmid clonesParrish,C.R.1991/7analysisAnimalsBase SequenceCapsidCatsCell LineCloning,MolecularDna,ViralDogsEpitopesFeline panleukopenia virusgeneticsHemagglutinationimmunologyisolation & purificationMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinePlasmidsRecombination,GeneticResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Restriction MappingultrastructureveterinaryNot in File195205Virology1831James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:1647068Virology1(PARRISH et al. 1985a; PARRISH et al. 1988d; PARRISH 1991a), wohingegen die neuen Varianten, die sich nur in einer Aminosureposition unterscheiden, in Hunde- und Katzepopulationen koexistieren. Diese Varianten sind in unterschiedlich ausgeprgter Verteilung weltweit vertreten. In den USA scheint das CPV-2b mit 80% dominant zu sein, whrend in Deutschland eine Verteilung von 60% CPV-2a zu 40% CPV-2b vorliegt ADDIN REFMGR.CITE Truyen199649Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeJournal49Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeTruyen,U.Evermann,J.F.Vieler,E.Parrish,C.R.1996/1/15analysisAnimalsAntigens,ViralBase SequenceCapsidCat DiseasesCatsclassificationDna,ViralDogsEvolutionFeline panleukopenia virusgeneticsGermanyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePhylogenyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryvirologyNot in File186189Virology2152Institute for Medical Microbiology, Ludwig Maximillians University, Munich, GermanyPM:8560765Virology1(TRUYEN et al. 1996c).
Transferrinrezeptor
Der Transferrinrezeptor ist physiologisch fr die Aufrechterhaltung der Eisen-Homostase der Zelle verantwortlich ADDIN REFMGR.CITE Ponka19998The transferrin receptor: role in health and diseaseJournal8The transferrin receptor: role in health and diseasePonka,P.Lok,C.N.1999/10AnimalsAnoxiabloodGene Expression RegulationgeneticsHealth StatusHumansphysiologyphysiopathologyReceptors,TransferrinResearch Support,Non-U.S.Gov'tNot in File11111137Int.J.Biochem.Cell Biol.3110Lady Davis Institute for Medical Research of the Sir Mortimer B. Davis Jewish General Hospital, Montreal, QC, Canada. mdpp@musica.mcgill.caPM:10582342Int.J.Biochem.Cell Biol.1(PONKA u. LOK 1999). Er wird auf vielen Zellen, aber vor allem auf mitotisch aktiven Zellen (Darmgewebe, lymphatisches System), exprimiert, welche das Hauptziel bei einer CPV- oder FPV-Infektion darstellen ADDIN REFMGR.CITE Parrish199552Pathogenesis of feline panleukopenia virus and canine parvovirusJournal52Pathogenesis of feline panleukopenia virus and canine parvovirusParrish,C.R.1995/3AnimalsAnimals,NewbornBone MarrowCat DiseasesCatsDog DiseasesDogsEnteritisFeline panleukopenia virusFetal DiseasesIntestine,SmallLeukopeniaLymphoid TissueMinkMyocarditisParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinepathogenicitypathologyphysiologyRaccoonsveterinaryvirologyVirus ReplicationNot in File5771Baillieres Clin.Haematol.81James A. Baker Institute for Animal Health, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY 14853, USAPM:7663051Baillieres Clin.Haematol.1(PARRISH 1995). Der Transferrinrezeptor ist ein Transmembran-Protein (90 kD) mit einem Amino- und einem Carboxyterminus. Der Aminoterminus befindet sich im Zytoplasma, der Carboxyterminus extrazellulr. Die extrazellulre Domne des humanen Transferrinrezeptors besitzt eine groe Sequenzhomologie zum felinen und caninen Rezeptor ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200321The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorJournal21The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorHueffer,K.Parker,J.S.Weichert,W.S.Geisel,R.E.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.2003/2Amino Acid SequenceAnimalsCapsidCatschemistryDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHumansimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryNot in File17181726J.Virol.773James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:12525605J.Virol.1(HUEFFER et al. 2003c). An der extrazellulren Domne kann eine helikale und eine apikale Domne, strukturell hnlich zu einer Protease, unterschieden werden. Die apikale Domne wurde als der Teil des Rezeptors identifiziert, der mit dem Kapsid von CPV und FPV interagiert ADDIN REFMGR.CITE Palermo200320Residues in the apical domain of the feline and canine transferrin receptors control host-specific binding and cell infection of canine and feline parvovirusesJournal20Residues in the apical domain of the feline and canine transferrin receptors control host-specific binding and cell infection of canine and feline parvovirusesPalermo,L.M.Hueffer,K.Parrish,C.R.2003/8Amino Acid SequenceAmino Acid SubstitutionanalysisAnimalsCapsidCatsCell LinechemistryDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGlycosylationimmunologymetabolismmicrobiologyMolecular Sequence DataMutagenesis,Site-DirectedParvovirusParvovirus,CaninephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence Homology,Amino AcidveterinaryNot in File89158923J.Virol.7716James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:12885908J.Virol.1(PALERMO et al. 2003a). Von besonderer Bedeutung fr die Kontrolle des Wirtsspektrums von CPV und FPV scheinen eine Insertion einer Asparagin-Aminosure in die apikale Domne des caninen Transferrinrezeptors und eine zustzliche Glykolisierungsstelle in dieser Domne zu sein ADDIN REFMGR.CITE Palermo200320Residues in the apical domain of the feline and canine transferrin receptors control host-specific binding and cell infection of canine and feline parvovirusesJournal20Residues in the apical domain of the feline and canine transferrin receptors control host-specific binding and cell infection of canine and feline parvovirusesPalermo,L.M.Hueffer,K.Parrish,C.R.2003/8Amino Acid SequenceAmino Acid SubstitutionanalysisAnimalsCapsidCatsCell LinechemistryDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGlycosylationimmunologymetabolismmicrobiologyMolecular Sequence DataMutagenesis,Site-DirectedParvovirusParvovirus,CaninephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence Homology,Amino AcidveterinaryNot in File89158923J.Virol.7716James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:12885908J.Virol.1(PALERMO et al. 2003c).
Als funktionaler Rezeptor fr CPV und FPV wurde zunchst der feline Transferrinrezeptor identifiziert ADDIN REFMGR.CITE Parker200124Canine and feline parvoviruses can use human or feline transferrin receptors to bind, enter, and infect cellsJournal24Canine and feline parvoviruses can use human or feline transferrin receptors to bind, enter, and infect cellsParker,J.S.Murphy,W.J.Wang,D.O'Brien,S.J.Parrish,C.R.2001/4Animalsantagonists & inhibitorsCapsidCatsCell LinechemistryChromosomesdrug effectsFeline panleukopenia virusgeneticsHela CellsHumansHybrid CellsImmune SerametabolismMiceMolecular Sequence DataParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinepharmacologyProtein Structure,TertiaryQuailRadiation Hybrid MappingReceptors,TransferrinReceptors,VirusResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Time FactorsveterinaryvirologyNot in File38963902J.Virol.758James A. Baker Institute, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:11264378J.Virol.1(PARKER et al. 2001). In Versuchen mit Zellkulturen wurden canine Zellen, die nicht fr FPV empfnglich sind, mit dem Gen des felinen Transferrinrezeptors transfiziert. Es zeigte sich, dass diese Zellen fr FPV empfnglich waren ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200321The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorJournal21The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorHueffer,K.Parker,J.S.Weichert,W.S.Geisel,R.E.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.2003/2Amino Acid SequenceAnimalsCapsidCatschemistryDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHumansimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryNot in File17181726J.Virol.773James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:12525605J.Virol.1(HUEFFER et al. 2003d) und eine Infektion caniner Zellen durch FPV unter normalen Bedingungen nicht mglich ist, weil ein funktionaler Rezeptor auf diesen Zellen fehlt. Das canine Wirtsspektrum wird diesen Untersuchungen zu Folge durch die Unterschiede in der Bindung von CPV und FPV an den caninen Transferrinrezeptor kontrolliert. Die Bindung an den Rezeptor wird durch die Regionen auf der Erhebung der 3x-Achse bestimmt ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200321The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorJournal21The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorHueffer,K.Parker,J.S.Weichert,W.S.Geisel,R.E.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.2003/2Amino Acid SequenceAnimalsCapsidCatschemistryDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHumansimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryNot in File17181726J.Virol.773James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:12525605J.Virol.1(HUEFFER et al. 2003e). Welche Aminosurepositionen und Aminosuren in dieser Region entscheidend fr eine strukturelle Vernderung des Kapsids und damit dem Wirtsspektrum sind, wird ausfhrlich in Punkt 2.10 beschrieben.
Bestimmte strukturelle Vernderungen in dieser Region fhren bei den antigenen Varianten CPV-2a/2b zu einer effektiveren Bindung an den caninen Transferrinrezeptor als bei CPV-2 und legen den Schluss nahe, dass die Bindung und die effektivere Nutzung des caninen Transferrinrezeptors wichtige Ereignisse in der Evolution und der Pathogenese des caninen Parvovirus darstellen ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200321The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorJournal21The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorHueffer,K.Parker,J.S.Weichert,W.S.Geisel,R.E.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.2003/2Amino Acid SequenceAnimalsCapsidCatschemistryDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHumansimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryNot in File17181726J.Virol.773James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:12525605J.Virol.1(HUEFFER et al. 2003f). Es ist anzunehmen, dass das ursprngliche CPV-2 den caninen Transferrinrezeptor nur ineffizient nutzen konnte und sich im weiteren Verlauf seiner Evolution die Bindungs- und damit die Infektionseffizienz verbesserte ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200312Parvovirus host range, cell tropism and evolutionJournal12Parvovirus host range, cell tropism and evolutionHueffer,K.Parrish,C.R.2003/8AnimalsCapsidDogsEvolutiongrowth & developmentMiceParvoviridae InfectionsParvoviruspathogenicityphysiologyReceptors,Cell SurfaceResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.virologyVirulenceNot in File392398Curr.Opin.Microbiol.64JA Baker Institute for Animal Health, Department of Microbiology Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY, USAPM:12941411Curr.Opin.Microbiol.1(HUEFFER u. PARRISH 2003a).
Evolutionre Mechanismen des Caninen Parvovirus
Die Anpassung des caninen Parvovirus an den Hund war ein komplexer Vorgang. Die Fhigkeit des Anzestors von CPV in den frhen 1970er Jahren Hunde zu infizieren, fhrte 1978 zu einer weltweiten Verbreitung des CPV-2 in einer schweren Pandemie.
Die Vernderungen im Genom von CPV im Vergleich zu FPV basieren auf wenigen Nukleotidunterschieden. Die kodierenden Nukleotidaustausche und die sich daraus ergebende Aminosureunterschiede im Kapsidprotein fhren zu einer Vernderung des Wirtsspektrums. Kontrolliert werden die Wirtsspektren von CPV und FPV durch 3 Regionen, die sich auf und um den sogenannten Three-fold-spike befinden. Insbesondere die zwei Aminosuren an den Positionen 93 und 323 im VP2 bestimmen zusammen das canine Wirtsspektrum. Versuche zeigten, dass Vernderungen dieser Aminosuren in FPV, vergleichend zu denen in CPV, dazu fhrten, dass diese so vernderten Viren nun in der Lage waren, auch canine Zellen zu infizieren. ADDIN REFMGR.CITE Chang199257Multiple amino acids in the capsid structure of canine parvovirus coordinately determine the canine host range and specific antigenic and hemagglutination propertiesJournal57Multiple amino acids in the capsid structure of canine parvovirus coordinately determine the canine host range and specific antigenic and hemagglutination propertiesChang,S.F.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.1992/12Amino Acid SequenceAnimalsAntigens,ViralBase SequenceCapsidCatsCell LinechemistryCloning,MolecularDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGenome,ViralHemagglutinationHemagglutination,ViralimmunologymetabolismmicrobiologyModels,MolecularMolecular Sequence DataMutagenesisMutagenesis,Site-DirectedOligodeoxyribonucleotidesParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinepathogenicityPlasmidsPolymerase Chain ReactionProtein Structure,SecondaryResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Restriction MappingTransfectionveterinaryVirus ReplicationX-Ray DiffractionNot in File68586867J.Virol.6612James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:1331498J.Virol.1Horiuchi199410Mapping of determinants of the host range for canine cells in the genome of canine parvovirus using canine parvovirus/mink enteritis virus chimeric virusesJournal10Mapping of determinants of the host range for canine cells in the genome of canine parvovirus using canine parvovirus/mink enteritis virus chimeric virusesHoriuchi,M.Goto,H.Ishiguro,N.Shinagawa,M.1994/6Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCapsidCell LinechemistryDnaDNA PrimersDNA,RecombinantDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGene Expression Regulation,ViralGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentmicrobiologyMinkMolecular Sequence DataMutagenesis,Site-DirectedOpen Reading FramesParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePlasmidsProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tSequence Homology,Amino AcidSequence Homology,Nucleic AcidveterinaryViral Structural ProteinsVirus ReplicationNot in File13191328J.Gen.Virol.75 ( Pt 6)Department of Veterinary Public Health, Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine, Hokkaido, JapanPM:8207398J.Gen.Virol.1Strassheim199455Two dominant neutralizing antigenic determinants of canine parvovirus are found on the threefold spike of the virus capsidJournal55Two dominant neutralizing antigenic determinants of canine parvovirus are found on the threefold spike of the virus capsidStrassheim,M.L.Gruenberg,A.Veijalainen,P.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.1994/1AnimalsAntigenic VariationAntigens,ViralCapsidCapsid ProteinsCell LinechemistryDogsdrug effectsEnteritisEpitopesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsHemagglutinationImmunodominant EpitopesimmunologyMinkModels,MolecularMolecular Sequence DataMutationNeutralization TestsParvovirusParvovirus,CanineProtein DenaturationResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence Analysis,DNAVariation (Genetics)veterinaryNot in File175184Virology1981James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:8259653Virology1Llamas-Saiz199643Structural analysis of a mutation in canine parvovirus which controls antigenicity and host rangeJournal43Structural analysis of a mutation in canine parvovirus which controls antigenicity and host rangeLlamas-Saiz,A.L.gbandje-McKenna,M.Parker,J.S.Wahid,A.T.Parrish,C.R.Rossmann,M.G.1996/11/1analysisAnimalsAntigens,ViralArginineAspartic AcidchemistryCrystallography,X-RayDNA ReplicationDogsEpitopesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsimmunologyMutationParvoviruspathogenicityPoint MutationProtein ConformationResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Virus ReplicationNot in File6571Virology2251Department of Biological Sciences, Purdue University, West Lafayette, Indiana 47907-1392, USAPM:8918534Virology1Parker199741Canine parvovirus host range is determined by the specific conformation of an additional region of the capsidJournal41Canine parvovirus host range is determined by the specific conformation of an additional region of the capsidParker,J.S.Parrish,C.R.1997/12AnimalsCapsidCatsCell LinechemistryDNA ReplicationDogsEpitopesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsHeatimmunologyModels,MolecularMutationParvoviruspathogenicityphysiologyPlasmidsProtein ConformationResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Structure-Activity RelationshipTransfectionUreaveterinaryVirus ReplicationNot in File92149222J.Virol.7112James A. Baker Institute for Animal Health, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:9371580J.Virol.1Hueffer200318Combinations of two capsid regions controlling canine host range determine canine transferrin receptor binding by canine and feline parvovirusesJournal18Combinations of two capsid regions controlling canine host range determine canine transferrin receptor binding by canine and feline parvovirusesHueffer,K.Govindasamy,L.gbandje-McKenna,M.Parrish,C.R.2003/9AnimalsCapsidCapsid ProteinsCatschemistryDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusimmunologymetabolismmicrobiologyParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryNot in File1009910105J.Virol.7718James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY 14853, USAPM:12941920J.Virol.1(CHANG et al. 1992b; HORIUCHI et al. 1994; STRASSHEIM et al. 1994b; LLAMAS-SAIZ et al. 1996b; PARKER u. PARRISH 1997; HUEFFER et al. 2003a). Allerdings fhrte ein Austausch von nur einer dieser Aminosuren zu keiner Vernderung des Wirtsspektrums. Dies deutet darauf hin, dass erst eine bestimme Kombination von Vernderungen in FPV dazu fhrte, dass dieses Virus canine Zellen infizieren konnte.
Bestimmte Aminosureaustausche in Regionen nahe den Aminosurepositionen 299 und 300 auf dem Three-fold-spike verhindern eine Infektion caniner Zellen. Diese Regionen scheinen das feline Wirtsspektrum in vivo zu kontrollieren ADDIN REFMGR.CITE Truyen199452Characterization of the feline host range and a specific epitope of feline panleukopenia virusJournal52Characterization of the feline host range and a specific epitope of feline panleukopenia virusTruyen,U.Agbandje,M.Parrish,C.R.1994/5/1AnimalsAntigens,ViralCapsidCatsCell LineComparative StudyEpitopesErythrocytesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusFlow CytometrygeneticsGenome,Viralgrowth & developmentHemagglutination,ViralImmunohistochemistryimmunologyisolation & purificationmicrobiologyMinkModels,MolecularMutationParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinepathogenicityRecombinant ProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File494503Virology2002James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:7513918Virology1(TRUYEN et al. 1994a). Die Aminosuresubstitutionen an den Positionen 80, 564 und 568 scheinen fr eine effiziente Vermehrung des Virus in der Katze verantwortlich zu sein ADDIN REFMGR.CITE Truyen199645Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeJournal45Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeTruyen,U.Evermann,J.F.Vieler,E.Parrish,C.R.1996/1/15analysisAnimalsAntigens,ViralBase SequenceCapsidCat DiseasesCatsclassificationDna,ViralDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGermanymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePhylogenyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryvirologyNot in File186189Virology2152Institute for Medical Microbiology, Ludwig Maximillians University, Munich, GermanyPM:8560765Virology1(TRUYEN et al. 1996d).
Die antigene Variante CPV-2a weist im Vergleich zu CPV-2 Aminosureaustausche an den Positionen 87, 300 und 305 auf. Diese befinden sich an der Schulterregion des Three-fold-spike ADDIN REFMGR.CITE Truyen199547Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal47Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMinkMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinePhylogenyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1Truyen199645Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeJournal45Evolution of canine parvovirus involved loss and gain of feline host rangeTruyen,U.Evermann,J.F.Vieler,E.Parrish,C.R.1996/1/15analysisAnimalsAntigens,ViralBase SequenceCapsidCat DiseasesCatsclassificationDna,ViralDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGermanymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePhylogenyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryvirologyNot in File186189Virology2152Institute for Medical Microbiology, Ludwig Maximillians University, Munich, GermanyPM:8560765Virology1(TRUYEN et al. 1995d; TRUYEN et al. 1996e). Bei dem ab 1984 nachgewiesenen anitgenen Typ CPV-2b sind im Vergleich zu CPV-2a Substitutionen an den Aminosurepositionen 426 und 555 vorhanden. In Abbildung 5 ist die Entstehung des CPV mit seinen neuen Varianten und den entsprechenden Aminosuresubstitutionen schematisch dargestellt.
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 5: Schema der Entstehung des caninen Parvovirus. Modifiziert nach ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200422[Evolution and host variation of the canine parvovirus: molecular basis for the development of a new virus]Journal22[Evolution and host variation of the canine parvovirus: molecular basis for the development of a new virus]Hueffer,K.Truyen,U.Parrish,C.R.2004/3AnimalsCapsid ProteinsCatschemistryDogsEnglish AbstractEvolutionimmunologyIn VitrometabolismmicrobiologyParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinepathogenicityphysiologyReceptors,TransferrinSpecies SpecificityveterinaryNot in File130135Berl Munch.Tierarztl.Wochenschr.1173-4J. A. Baker Institute for Animal Health, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University Ithaca, New York, USAPM:15046459Berl Munch.Tierarztl.Wochenschr.1(HUEFFER et al. 2004)
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 6: Asymmetrische Untereinheit des CPV Kapsid mit Darstellung der Lokalisation substituierter Aminosuren auf der Kapsidoberflche ADDIN REFMGR.CITE Shackelton20056High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusJournal6High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusShackelton,L.A.Parrish,C.R.Truyen,U.Holmes,E.C.2005/1/11AnimalsBase SequenceclassificationDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataParvovirus,CaninePhylogenyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Selection (Genetics)Not in File379384Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1022Department of Zoology, University of Oxford, South Parks Road, Oxford OX1 3PS, United KingdomPM:15626758Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1(SHACKELTON et al. 2005d)
Die Funktion einiger Mutationen wurde in verschiedenen Studien bestimmt. Die Aminosureaustausche an den Positionen 93 und 323 kontrollieren zusammen die Bindung an den caninen Transferrinrezeptor ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200318Combinations of two capsid regions controlling canine host range determine canine transferrin receptor binding by canine and feline parvovirusesJournal18Combinations of two capsid regions controlling canine host range determine canine transferrin receptor binding by canine and feline parvovirusesHueffer,K.Govindasamy,L.gbandje-McKenna,M.Parrish,C.R.2003/9AnimalsCapsidCapsid ProteinsCatschemistryDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusimmunologymetabolismmicrobiologyParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryNot in File1009910105J.Virol.7718James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY 14853, USAPM:12941920J.Virol.1(HUEFFER et al. 2003b). Die Vernderungen der Aminosuren an den Positionen 87, 300 und 305, die bei CPV-2a vorliegen, fhren zu einer verbesserten bzw. effektiveren Bindung an den caninen Transferrinrezeptor ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200321The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorJournal21The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorHueffer,K.Parker,J.S.Weichert,W.S.Geisel,R.E.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.2003/2Amino Acid SequenceAnimalsCapsidCatschemistryDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHumansimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryNot in File17181726J.Virol.773James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:12525605J.Virol.1(HUEFFER et al. 2003g). Dies legt den Schluss nahe, dass CPV-2a durch diese Fhigkeiten in der Lage war, die frhere antigene Variante CPV-2 vollstndig zu verdrngen und dass diese Aminosureaustausche von zentraler Bedeutung in der Evolution und Pathogenese des caninen Parvovirus sind ADDIN REFMGR.CITE Hueffer200321The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorJournal21The natural host range shift and subsequent evolution of canine parvovirus resulted from virus-specific binding to the canine transferrin receptorHueffer,K.Parker,J.S.Weichert,W.S.Geisel,R.E.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.2003/2Amino Acid SequenceAnimalsCapsidCatschemistryDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusHumansimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinephysiologyReceptors,TransferrinResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryNot in File17181726J.Virol.773James A. Baker Institute, Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USAPM:12525605J.Virol.1(HUEFFER et al. 2003h).
Die Unterschiede in diesen Aminosurepositionen haben neben der Vernderung des Wirtsspektrum und der Bindung an den Transferrinrezeptor auch zu Vernderungen der Epitope des Kapsidproteins gefhrt. Der Unterschied zwischen FPV und CPV an dem CPV-spezifischen Epitop um Aminosure 93 ADDIN REFMGR.CITE Chang199257Multiple amino acids in the capsid structure of canine parvovirus coordinately determine the canine host range and specific antigenic and hemagglutination propertiesJournal57Multiple amino acids in the capsid structure of canine parvovirus coordinately determine the canine host range and specific antigenic and hemagglutination propertiesChang,S.F.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.1992/12Amino Acid SequenceAnimalsAntigens,ViralBase SequenceCapsidCatsCell LinechemistryCloning,MolecularDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGenome,ViralHemagglutinationHemagglutination,ViralimmunologymetabolismmicrobiologyModels,MolecularMolecular Sequence DataMutagenesisMutagenesis,Site-DirectedOligodeoxyribonucleotidesParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinepathogenicityPlasmidsPolymerase Chain ReactionProtein Structure,SecondaryResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Restriction MappingTransfectionveterinaryVirus ReplicationX-Ray DiffractionNot in File68586867J.Virol.6612James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:1331498J.Virol.1(CHANG et al. 1992a) zeigte sich in einer Substitution von Lys zu Asn. Zwischen CPV-2 und CPV-2a waren mehrere Aminosureaustausche im Kapsidprotein (AS 87, 300, 305) an dem Verlust eines CPV-2 spezifischen Epitops und dem Gewinn eines fr CPV-2a spezifischen Epitops beteiligt ADDIN REFMGR.CITE Strassheim199455Two dominant neutralizing antigenic determinants of canine parvovirus are found on the threefold spike of the virus capsidJournal55Two dominant neutralizing antigenic determinants of canine parvovirus are found on the threefold spike of the virus capsidStrassheim,M.L.Gruenberg,A.Veijalainen,P.Sgro,J.Y.Parrish,C.R.1994/1AnimalsAntigenic VariationAntigens,ViralCapsidCapsid ProteinsCell LinechemistryDogsdrug effectsEnteritisEpitopesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsHemagglutinationImmunodominant EpitopesimmunologyMinkModels,MolecularMolecular Sequence DataMutationNeutralization TestsParvovirusParvovirus,CanineProtein DenaturationResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence Analysis,DNAVariation (Genetics)veterinaryNot in File175184Virology1981James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:8259653Virology1(STRASSHEIM et al. 1994a). Das CPV-2b spezifische Epitop um Aminosure 426 ADDIN REFMGR.CITE Parrish199170Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirusJournal70Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine parvovirusParrish,C.R.Aquadro,C.F.Strassheim,M.L.Evermann,J.F.Sgro,J.Y.Mohammed,H.O.1991/12Amino Acid SequenceanalysisAnimalsAntibodies,MonoclonalAntigens,ViralBase SequenceCapsidCatsCell LineDna,ViralDogsEvolutionGenes,Viralgeneticsimmunologyisolation & purificationMolecular Sequence DataMutationParvoviridaeParvovirusPhylogenyResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Restriction MappingultrastructureVariation (Genetics)veterinaryNot in File65446552J.Virol.6512James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, New YorkPM:1942246J.Virol.1(PARRISH et al. 1991d) vernderte im Vergleich zu CPV-2a ebenfalls ein Epitop des Virus.
Vernderungen weiterer Aminosuren in CPV-2a/2b finden sich an zwei Regionen des VP2 nahe den Positionen 93 und 300 auf dem Three-fold-spike, zum einen an der Aminosureposition 426, zum anderen an der Position 297. Diese Aminosurevernderungen wurden bei zwei CPV-Isolaten von Hunden aus Italien beschrieben ADDIN REFMGR.CITE Buonavoglia2001108Evidence for evolution of canine parvovirus type 2 in ItalyJournal108Evidence for evolution of canine parvovirus type 2 in ItalyBuonavoglia,C.Martella,V.Pratelli,A.Tempesta,M.Cavalli,A.Buonavoglia,D.Bozzo,G.Elia,G.Decaro,N.Carmichael,L.2001/12analysisAnimalsAntigens,ViralCapsidDiarrheaDNA PrimersDog DiseasesDogsEpitopesEvolutionEvolution,MoleculargeneticsimmunologyItalyParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CaninePolymorphism,Restriction Fragment LengthSequence Analysis,ProteinVariation (Genetics)veterinaryNot in File30213025J.Gen.Virol.82Pt 12Department of Animal Health and Well-being, Faculty of Veterinary Medicine of Bari, S.p. per Casamassima km 3, 70010 Valenzano, Bari, Italy. c.buonavoglia@veterinaria.uniba.itPM:11714979J.Gen.Virol.1(BUONAVOGLIA et al. 2001b). Die Aminosuren Asn bei CPV-2a und Asp bei CPV-2b die an der Position 426 vorliegen, wurden durch Glu ersetzt. Mglicherweise handelt es sich um eine neue Variante des caninen Parvovirus, die in der Hundepopulation in Italien neben CPV-2a und 2b koexistiert ADDIN REFMGR.CITE Buonavoglia2001108Evidence for evolution of canine parvovirus type 2 in ItalyJournal108Evidence for evolution of canine parvovirus type 2 in ItalyBuonavoglia,C.Martella,V.Pratelli,A.Tempesta,M.Cavalli,A.Buonavoglia,D.Bozzo,G.Elia,G.Decaro,N.Carmichael,L.2001/12analysisAnimalsAntigens,ViralCapsidDiarrheaDNA PrimersDog DiseasesDogsEpitopesEvolutionEvolution,MoleculargeneticsimmunologyItalyParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CaninePolymorphism,Restriction Fragment LengthSequence Analysis,ProteinVariation (Genetics)veterinaryNot in File30213025J.Gen.Virol.82Pt 12Department of Animal Health and Well-being, Faculty of Veterinary Medicine of Bari, S.p. per Casamassima km 3, 70010 Valenzano, Bari, Italy. c.buonavoglia@veterinaria.uniba.itPM:11714979J.Gen.Virol.1(BUONAVOGLIA et al. 2001c).
Die Aminosuresubstitution an Position 297 (Ala(Ser) wurde bei verschiedenen CPV-Isolaten in Deutschland nachgewiesen ADDIN REFMGR.CITE Truyen199948Emergence and recent evolution of canine parvovirusJournal48Emergence and recent evolution of canine parvovirusTruyen,U.1999/9/1AnimalsCatsDogsEvolution,MolecularFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusFoxesgeneticsmicrobiologyParvovirusParvovirus,CaninepathogenicityResearch Support,Non-U.S.Gov'tNot in File4750Vet.Microbiol.691-2Institute for Medical Microbiology, Infectious and Epidemic Diseases, Ludwig Maximilians University Munich, Germany. uwe.truyen@lrz.uni-muenchen.dePM:10515268Vet.Microbiol.1(TRUYEN 1999a). Diese Mutation kommt sowohl bei CPV-2a als auch CPV-2b vor und scheint in Deutschland sehr verbreitet zu sein. Ebenso wurde diese Vernderung bei Isolaten in Asien ADDIN REFMGR.CITE Ikeda2000109Predominance of canine parvovirus (CPV) in unvaccinated cat populations and emergence of new antigenic types of CPVs in catsJournal109Predominance of canine parvovirus (CPV) in unvaccinated cat populations and emergence of new antigenic types of CPVs in catsIkeda,Y.Mochizuki,M.Naito,R.Nakamura,K.Miyazawa,T.Mikami,T.Takahashi,E.2000/12/5Amino Acid SequenceanalysisAnimalsAntigenic VariationAntigens,ViralAsparagineCapsidCarnivoraCatsclassificationComparative StudyFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsGlycineHemagglutination Inhibition TestsimmunologyJapanmicrobiologyMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePhylogenyPolymerase Chain ReactionResearch Support,Non-U.S.Gov'tTaiwanveterinaryVietnamvirologyNot in File1319Virology2781Department of Veterinary Microbiology, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, Bunkyo-ku, Tokyo, 113-8657, JapanPM:11112475Virology1(IKEDA et al. 2000c) und Italien ADDIN REFMGR.CITE Buonavoglia2001108Evidence for evolution of canine parvovirus type 2 in ItalyJournal108Evidence for evolution of canine parvovirus type 2 in ItalyBuonavoglia,C.Martella,V.Pratelli,A.Tempesta,M.Cavalli,A.Buonavoglia,D.Bozzo,G.Elia,G.Decaro,N.Carmichael,L.2001/12analysisAnimalsAntigens,ViralCapsidDiarrheaDNA PrimersDog DiseasesDogsEpitopesEvolutionEvolution,MoleculargeneticsimmunologyItalyParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CaninePolymorphism,Restriction Fragment LengthSequence Analysis,ProteinVariation (Genetics)veterinaryNot in File30213025J.Gen.Virol.82Pt 12Department of Animal Health and Well-being, Faculty of Veterinary Medicine of Bari, S.p. per Casamassima km 3, 70010 Valenzano, Bari, Italy. c.buonavoglia@veterinaria.uniba.itPM:11714979J.Gen.Virol.1Battilani200164Analysis of canine parvovirus sequences from wolves and dogs isolated in ItalyJournal64Analysis of canine parvovirus sequences from wolves and dogs isolated in ItalyBattilani,M.Scagliarini,A.Tisato,E.Turilli,C.Jacoboni,I.Casadio,R.Prosperi,S.2001/7Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidchemistryclassificationComparative StudyDog DiseasesDogsFecesGastroenteritisGenes,ViralgeneticsItalyMolecular Sequence DataMutationParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CaninePhylogenyProtein Structure,TertiaryResearch Support,Non-U.S.Gov'tSequence AlignmentveterinaryvirologyWolvesNot in File15551560J.Gen.Virol.82Pt 7Dipartimento di Sanita Pubblica Veterinaria e Patologia Animale, Universita degli Studi di Bologna, Via Tolara di Sopra 50, 40064-Ozzano Emilia, Bologna, Italy. Mbattilani@vet.unibo.itPM:11413365J.Gen.Virol.1(BATTILANI et al. 2001; BUONAVOGLIA et al. 2001d) nachgewiesen. In den USA scheint diese Mutation bis wenigstens 1999 in CPV-2a/2b nicht vorherrschend zu sein ADDIN REFMGR.CITE Truyen199948Emergence and recent evolution of canine parvovirusJournal48Emergence and recent evolution of canine parvovirusTruyen,U.1999/9/1AnimalsCatsDogsEvolution,MolecularFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusFoxesgeneticsmicrobiologyParvovirusParvovirus,CaninepathogenicityResearch Support,Non-U.S.Gov'tNot in File4750Vet.Microbiol.691-2Institute for Medical Microbiology, Infectious and Epidemic Diseases, Ludwig Maximilians University Munich, Germany. uwe.truyen@lrz.uni-muenchen.dePM:10515268Vet.Microbiol.1(TRUYEN 1999b).
Weitere Aminosureaustausche wurden bei Leopardenkatzen aus Vietnam und Taiwan beschrieben ADDIN REFMGR.CITE Nakamura200463A novel antigenic variant of Canine parvovirus from a Vietnamese dogJournal63A novel antigenic variant of Canine parvovirus from a Vietnamese dogNakamura,M.Tohya,Y.Miyazawa,T.Mochizuki,M.Phung,H.T.Nguyen,N.H.Huynh,L.M.Nguyen,L.T.Nguyen,P.N.Nguyen,P.V.Nguyen,N.P.Akashi,H.2004/11AnimalsAntibodies,MonoclonalCapsidCapsid ProteinsCatschemistryclassificationDogsgeneticsHemagglutination Inhibition TestsimmunologyJapanmicrobiologyParvovirusParvovirus,CanineResearch Support,Non-U.S.Gov'tveterinaryVietnamNot in File22612269Arch.Virol.14911Department of Veterinary Microbiology, Graduate School of Agricultural and Life Sciences, The University of Tokyo, Tokyo, JapanPM:15503211Arch.Virol.1(NAKAMURA et al. 2004b). Diese neue Variante (CPV-2c) weist an der Aminosureposition 300 einen Austausch von Gly durch Asp auf.
Weitere Nukleotidaustausche, die vereinzelt weltweit vorkommen, wurden bei verschiedenen CPV-Isolaten beschrieben. Es wird vermutet, dass diese zusammen mit anderen im Genom vorkommenden Austauschen korrelieren ADDIN REFMGR.CITE Parrish20061Parvovirus host range, cell tropism and evolution - studies of canine and feline parvoviruses, minute virus of mice, porcine parvovirus, and Aleutian mink disease virusBook Chapter1Parvovirus host range, cell tropism and evolution - studies of canine and feline parvoviruses, minute virus of mice, porcine parvovirus, and Aleutian mink disease virusParrish,Colin R.Hueffer,Karsten2006Not in File343350ParvovirusesKerr,Jonathan R.Cotmore,Susan F.Bloom,Marshall E.Linden,MichaelParrish,Colin R.23LondonHodder Arnold3(PARRISH u. HUEFFER 2006).
Die immer wieder neu auftauchenden Nukleotidaustausche weisen darauf hin, dass die Anpassung des caninen Parvovirus an den Wirt Hund noch nicht abgeschlossen ist und in den folgenden Jahren mit einer Weiterentwicklung des Virus gerechnet werden kann.
Theorien zur Entstehung des CPV
Zum Entstehungsmechanismus des caninen Parvovirus gibt es verschiedene Theorien. Eine Theorie basiert auf der Annahme, dass sich CPV durch eine zufllige Mutation der Nukleotide in FPV entwickelt hat. Phylogenetische Sequenzvergleiche der beiden Viren aus den 1970er Jahren zeigten allerdings, dass sich Isolate von CPV und FPV immer deutlich unterschieden. Es wurde bis heute keine Zwischenform in FPV- und CPV-Sequenzen aus dieser Zeit gefunden, die eine zufllige Entstehung von CPV aus FPV erklren knnte.
Der Einsatz von FPV-Lebendvakzinen fhrte frh zu einer weiteren Theorie, welche eine mgliche Entstehung von CPV aus einer vernderten FPV-Vakzine vermutete. In Untersuchungen mit polyklonalen Seren und Restriktionsenzymen frher CPV-Isolate sowie FPV-Vakzine-Stmme aus den 1970er Jahren wurde eine enge Verwandschaft von CPV und FPV nachgewiesen ADDIN REFMGR.CITE Tratschin198265Canine parvovirus: relationship to wild-type and vaccine strains of feline panleukopenia virus and mink enteritis virusJournal65Canine parvovirus: relationship to wild-type and vaccine strains of feline panleukopenia virus and mink enteritis virusTratschin,J.D.McMaster,G.K.Kronauer,G.Siegl,G.1982/7analysisAnimalsAntigens,ViralCell LineComparative StudyDnaDNA Restriction EnzymesDna,ViralDogsEnteritisEpitopesFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusimmunologymicrobiologyParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinephysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tSpecies SpecificityViral VaccinesVirus ReplicationNot in File3341J.Gen.Virol.61 (Pt l)PM:6181186J.Gen.Virol.1(TRATSCHIN et al. 1982). Die Vermehrungsfhigkeit von CPV in felinen Zellkulturen sttzt diese Theorie. Es konnte jedoch kein Nachweis einer direkten Abstammung aus den FPV-Impfstmmen erbracht werden. Eingehende Sequenzanalysen der viralen DNA frher CPV-Isolate aus 1978/79, der FPV-Impfstmme sowie FPV-Isolate aus dieser Zeit widerlegten diese Theorie ADDIN REFMGR.CITE Truyen199841No evidence for a role of modified live virus vaccines in the emergence of canine parvovirusJournal41No evidence for a role of modified live virus vaccines in the emergence of canine parvovirusTruyen,U.Geissler,K.Parrish,C.R.Hermanns,W.Siegl,G.1998/5AnimalsBase SequenceCapsidCapsid ProteinsCatsclassificationDna,ViralDogsEvolutionFeline panleukopenia virusgeneticsimmunologyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelineResearch Support,Non-U.S.Gov'tVaccines,AttenuatedViral VaccinesvirologyNot in File11531158J.Gen.Virol.79 ( Pt 5)Institute for Medical Microbiology, Ludwig Maximillians University, Munich, Germany. Uwe.Truyen@LRZ.uni-muenchen.dePM:9603330J.Gen.Virol.1(TRUYEN et al. 1998a).
Eine Sequenz eines Parvovirus-Isolats bei einem europischen Rotfuchs (Vulpes vulpes) sttzt eine dritte Theorie, die eine Entwicklung des CPV ber FPV-hnliche Viren bei Wildtieren fr mglich hlt ADDIN REFMGR.CITE Truyen199816Survey on viral pathogens in wild red foxes (Vulpes vulpes) in Germany with emphasis on parvoviruses and analysis of a DNA sequence from a red fox parvovirusJournal16Survey on viral pathogens in wild red foxes (Vulpes vulpes) in Germany with emphasis on parvoviruses and analysis of a DNA sequence from a red fox parvovirusTruyen,U.Muller,T.Heidrich,R.Tackmann,K.Carmichael,L.E.1998/10Adenoviruses,CanineAmino Acid SequenceanalysisAnimalsCatsDisease OutbreaksDistemperDistemper Virus,CanineDnaDogsFoxesgeneticsHerpesvirus 1,CanidimmunologyMolecular Sequence DataParvovirusParvovirus,CaninepathogenicityResearch Support,Non-U.S.Gov'tSequence Analysis,DNASequence Homology,Amino AcidSeroepidemiologic StudiesveterinaryvirologyNot in File433440Epidemiol.Infect.1212Institute for Medical Microbiology, Infectious and Epidemic Diseases, University of Munich, GermanyPM:9825797Epidemiol.Infect.1(TRUYEN et al. 1998d). Diese DNA-Sequenz weist einen kodierenden Nukleotidunterschied an Position 3094 auf, der zu einer Aminosuresubstitution an Position 103 (Val(Ile) im VP2 fhrt. Das pltzliche Auftreten von CPV in domestizierten Hundepopulationen knnte durch eine bertragung dieses Virus von wilden auf domestizierte Carnivoren erklrt werden ADDIN REFMGR.CITE Truyen199816Survey on viral pathogens in wild red foxes (Vulpes vulpes) in Germany with emphasis on parvoviruses and analysis of a DNA sequence from a red fox parvovirusJournal16Survey on viral pathogens in wild red foxes (Vulpes vulpes) in Germany with emphasis on parvoviruses and analysis of a DNA sequence from a red fox parvovirusTruyen,U.Muller,T.Heidrich,R.Tackmann,K.Carmichael,L.E.1998/10Adenoviruses,CanineAmino Acid SequenceanalysisAnimalsCatsDisease OutbreaksDistemperDistemper Virus,CanineDnaDogsFoxesgeneticsHerpesvirus 1,CanidimmunologyMolecular Sequence DataParvovirusParvovirus,CaninepathogenicityResearch Support,Non-U.S.Gov'tSequence Analysis,DNASequence Homology,Amino AcidSeroepidemiologic StudiesveterinaryvirologyNot in File433440Epidemiol.Infect.1212Institute for Medical Microbiology, Infectious and Epidemic Diseases, University of Munich, GermanyPM:9825797Epidemiol.Infect.1(TRUYEN et al. 1998c).
Untersuchungen zu phylogenetischen Verwandtschaftsverhltissen der Familien Canidae und Felidae der Ordnung Carnivora ergaben, dass es unter den Caniden Spezies gibt, die verwandtschaftlich gesehen den Feliden nher stehen als dem Hund. Diese Spezies (z.B. Fchse, Nerze, Waschbren) knnten als potentielle Wirte fr eine intermedire Form des CPV gedient und diese auf den Hund bertragen haben. Im Anschluss knnte eine Anpassung an den neuen Wirt Hund erfolgt sein.
Neuere Studien, welche die Substitutionsraten von verschiedenen Parvovirussequenzen aus der Genbank untersuchten, ergaben, dass CPV bereits 10 Jahre vor der weltweiten Ausbreitung im Jahr 1978 in den caninen Populationen hat zirkulieren mssen ADDIN REFMGR.CITE Shackelton20056High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusJournal6High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusShackelton,L.A.Parrish,C.R.Truyen,U.Holmes,E.C.2005/1/11AnimalsBase SequenceclassificationDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataParvovirus,CaninePhylogenyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Selection (Genetics)Not in File379384Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1022Department of Zoology, University of Oxford, South Parks Road, Oxford OX1 3PS, United KingdomPM:15626758Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1(SHACKELTON et al. 2005c).
CPV-2 mit einem ermittelten mittleren Alter von 36 Jahren zirkulierte demnach zwischen 1968 und 1978 in den caninen Populationen. Ein Bericht aus Griechenland, in dem rckwirkend 1974 CPV-Antikrper in einem Hundeserum nachgewiesen wurde, sttzt diese Annahme ADDIN REFMGR.CITE Koptopoulos19869Presence of antibody cross-reacting with canine parvovirus in the sera of dogs from GreeceJournal9Presence of antibody cross-reacting with canine parvovirus in the sera of dogs from GreeceKoptopoulos,G.Papadopoulos,O.Papanastasopoulou,M.Cornwell,H.J.1986/3/22AnimalsAntibodies,ViralComparative StudyCross ReactionsDog DiseasesDogsEnteritisGreeceHemagglutination Inhibition TestsimmunologyNeutralization TestsParvoviridaeRetrospective StudiesveterinaryNot in File332333Vet.Rec.11812PM:3705371Vet.Rec.1(KOPTOPOULOS et al. 1986b). Fr CPV-2a wurde im Mittel ein Alter von 28 Jahren bestimmt. Diese Variante des caninen Parvovirus existierte nach diesen Untersuchungen bereits seit 1976. Es wird angenommen, dass diese beiden Varianten des caninen Parvovirus in den 1970er Jahren in den caninen Populationen kozirkulierten und ntzliche Mutationen unter strenger positiver Selektion anhuften, bis es schlielich zum Ausbruch einer Epidemie kam ADDIN REFMGR.CITE Shackelton20056High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusJournal6High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusShackelton,L.A.Parrish,C.R.Truyen,U.Holmes,E.C.2005/1/11AnimalsBase SequenceclassificationDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataParvovirus,CaninePhylogenyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Selection (Genetics)Not in File379384Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1022Department of Zoology, University of Oxford, South Parks Road, Oxford OX1 3PS, United KingdomPM:15626758Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1(SHACKELTON et al. 2005b).
Material und Methoden
Material
Probenauswahl
Die im Rahmen der vorliegenden Arbeit ausgewhlten und untersuchten Proben wurden freundlicherweise vom Institut fr Pathologie der Stiftung Tierrztliche Hochschule Hannover zur Verfgung gestellt.
Es wurde ein Zeitraum von 1970 bis 1980 festgelegt. In diesem Zeitraum erfolgte eine Auswahl der in Befundordnern dokumentierten Flle. Dabei handelte es sich um Hunde- und Katzenproben sowie eventuell vorhandene Proben anderer Karnivoren.
Die Proben wurden nach folgenden Kriterien in Vorberichten und Befunden ausgewhlt. Vorberichtliche Erwhnungen wie Erbrechen, Durchfall, katarrhalische oder hmorrhagische Enteritis, Welpensterben als Bestandproblem, pltzlicher Tod sowie Ataxie und Verdacht auf Panleukopenie bei Katzen wurden als Hinweise fr eine Infektion mit Parvoviren gewertet. Bei den pathologisch-anatomischen Befunden, den pathologischen Diagnosen und den histopathologischen Befunden wurde auf Kriterien wie katarrhalische bis fibrinse Enteritis, andere pathologische Vernderungen des Darmepithels (z.B. Zottenatrophie, Abschilferung des Darmepithels) und Lymphopenie geachtet. Weitere Auswahlkriterien bei Katzen waren Hinweise auf Panleukopenie oder auch Katzenseuche sowie Myokarditis und Parvovirose bei Hunden. Die Auswahl erfolgte, wenn mindestens eines der aufgefhrten Kriterien erfllt wurde.
Die Paraffinblcke mit Darm- und/ oder Herzgewebe von ausgewhlten Fllen wurden aussortiert und gekennzeichnet.
Methoden
Probennahme
Von jedem Paraffinblock wurden jeweils drei Schnitte mit einer Dicke von 10(m mit Hilfe eines Schlittenmicrotoms (Firma Jung) entnommen und anschlieend in 1,5 ml Eppendorfgefe verbracht. Nach jeder Probe wurden zwei Schnitte von einem paraffineingebetteten Gehirngewebe eines Hirsches zur Kontaminationskontrolle entnommen.
Die Desinfektion des Arbeitsplatzes erfolgte jahrgangsweise nach den Katzen- bzw. Hundeproben mit 70%igem Ethanol und 10%igem Natriumhypochlorit. Die Klingen des Schlittenmicrotoms wurden gewechselt.
Aufreinigung der Proben
Um die DNA isolieren zu knnen, wurden die Gewebeproben mit 1200(l Xylol deparaffinisiert und anschlieend zweimal mit jeweils 1200(l 100%igem Ethanol gewaschen ADDIN REFMGR.CITE Truyen199465Detection of canine parvovirus DNA in paraffin-embedded tissues by polymerase chain reactionJournal65Detection of canine parvovirus DNA in paraffin-embedded tissues by polymerase chain reactionTruyen,U.Platzer,G.Parrish,C.R.Hanichen,T.Hermanns,W.Kaaden,O.R.1994/4analysisAnimalsBase SequenceCat DiseasesCatschemistryCodonDiseaseDNA PrimersDna,ViralDog DiseasesDogsFeline PanleukopeniageneticsGermanyMolecular Sequence DataParaffin EmbeddingParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CaninePolymerase Chain ReactionveterinaryvirologyNot in File148152Zentralbl.Veterinarmed.B412Ludwig-Maximilians-Universitat, Munchen, GermanyPM:7985432Zentralbl.Veterinarmed.B1(TRUYEN et al. 1994b). Bis zur vollstndigen Verdunstung des Ethanols wurden die Proben in den geffneten Eppendorfgefen unter dem Abzug getrocknet.
Die weitere DNA-Aufreinigung wurde mit Hilfe des DNA Micro Kit (Qiagen, Hilden) gem den Angaben des Herstellers durchgefhrt. Das Gewebe wird bei der Aufreinigung zunchst lysiert und anschlieend auf eine Silikagel-Membran aufgetragen. Die DNA wird durch Zentrifugieren an der Membran adsorbiert. Nach zweimaligem Waschen mit Pufferlsungen wird die DNA mit Hilfe eines weiteren Puffers eluiert. Das Eluat diente dem anschlieenden Nachweis der parvoviralen DNA.
Auswahl der Oligonukleotide
Zum Nachweis der parvoviralen DNA wurde das von Steinel et al. (2000) verffentliche Oligonukleotidpaar M1RE+M2RE verwendet. Weitere angegebene Oligonukleotidpaare (M10+M11, M13+M44, M1+M41) konnten nicht verwendet werden, da mit diesen keine Ergebnisse bei den Proben erzielt werden konnten. Daher wurden zur vollstndigen Sequenzierung des VP2-Gens weitere Oligonukleotide anhand einer FPV-Nukleotidsequenz (Genbank-Nr. M24004, FPV-b Isolat CU4) entweder mit dem Programm Primer 3 ADDIN REFMGR.CITE Rozen20005Primer3 on the WWW for general users and for biologist programmersJournal5Primer3 on the WWW for general users and for biologist programmersRozen,SteveSkaletski,J.Helen2000Not in File365386In Krawetz S.Misener S.(eds) Bioinformatics Methods and Protocols: Methods in Molekular Biology Humana PressTotowa,NJIn Krawetz S.Misener S.(eds) Bioinformatics Methods and Protocols: Methods in Molekular Biology Humana Press1(ROZEN u. SKALETSKI 2000) oder manuell erstellt. Die berprfung der Oligonukleotide hinsichtlich ihrer Spezifitt wurde mit der Datenbank des National Center for Biotechnology Information (NCBI, Bethesda, MD, USA, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/) und dem Programm BLAST ADDIN REFMGR.CITE Altschul19975Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programsJournal5Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programsAltschul,S.F.Madden,T.L.Schaffer,A.A.Zhang,J.Zhang,Z.Miller,W.Lipman,D.J.1997/9/1AlgorithmsAmino Acid SequenceAnimalschemistryDatabases,FactualDnaHumansMolecular Sequence DataProteinsResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence AlignmentSoftwareNot in File33893402Nucleic Acids Res.2517pdf ja teilw.National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, National Institutes of Health, Bethesda, MD 20894, USA. altschul@ncbi.nlm.nih.govPM:9254694Nucleic Acids Res.1(ALTSCHUL et al. 1997) durchgefhrt. Die berprfung erfolgte, um eine fehlerhafte Anlagerung (sog. mismatching) der Oligonukleotide an hnliche, nicht FPV- bzw. CPV- spezifische Gensequenzen zu verhindern. Die Bezeichnung der Oligonukleotide, die Sequenz und die Nukleotid-Position bezogen auf die Nukleotidsequenz des FPV-b Isolates CU4 sind in Tabelle 2 aufgefhrt.
Die Synthese der Oligonukleotide erfolgte durch die Firma Biomers(, Ulm.
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 2: Oligonukleotide
PrimerNukleotidsequenz nt-PositionFragmentlngeA0f5-cca tca aca tca aga cca aca-3379-399156 bpA0r5-gac cac cgt ctg gtt gaa ct-3535-516Af5-ccg gtg cag gac aag taa aa-3464-483167 bpAr5-tac ccg tag aaa tcc cca ca-3631-612A1f5-ggt gca gga caa gta aaa ag-3466-485238 bpA1r5-agt ctg ctt gag ttt gct gt-3704-685M1RE5-(agc tgt cga c(ga aaa cgg atg ggt gga aat-3656-683240 bpM2RE5-(gct cga gaa ttc( agt tgc caa tct cct gga tt-3896-865A2f5-cat tgg ttg atg caa atg ct-3830-849237 bpA2r5-gct gct gga gta aat ggc ata-31067-1047A3f5-cat tga tgg ttg cat tag at-3'1016-1035238 bpA3r5-tgg cac aga att ttc aat ag-31254-1235A4f5-cca tgg aaa cca acc ata cc-31096-1115227 bpA4r5-tct aca tgg ttt Rca atc aaa aa-31323-1301Bf5-taa gaa cag gtg atg aat tt-31265-1284241 bpBr5-ctc agc tgg tct cat aat ag-31506-1487B1f5-tgc ctc aat ctg aag gag cta-31382-1402243 bpB1r5-tca cca tct gct gct tga tt-31625-1606B2f5-cgt cta cac aag ggc cat tta-31541-1561207 bpB2r5-tga atc caa tct cct tct gga-31748-1728B3f5-caa cag gag aaa cac ctg aga g-31670-1691242 bpB3r5-ccc aaa ttt gac cat ttg gat-31912-1892B4f5-cca att gga ggt aaa aca gga-31804-1824220 bpB4r5-ttc gtt aaa tta ggc gca ac-32024-2005B5f5-cac cag ttt atc caa atg gtc a-31883-1904210 bpB5r5-cct ttc cac caa aaa tct gaa-32093-2073Cf5-atc ctg atg cat ctg cta at-32033-2052207 bpCr5-ggt gct agt tga gat ttt tca t-32240-2219C1f5-ttc aga ttt ttg gtg gaa agg-32073-2093234 bpC1r5-tgt tct agg tgc tag ttg ata tg-32307-2285
Polymerase-Kettenreaktion
Durchfhrung der PCR
Die Polymerase-Kettenreaktion ist eine in-vitro-Methode, um DNA spezifisch zu amplifizieren. Es werden zwei Primer bentigt, wobei einer am 3-Ende des zu amplifizierenden DNA-Abschnittes, der andere am 5-Ende bindet. Dadurch sind zwei Startpunkte fr die DNA-Polymerasereaktion definiert. Die Vervielfltigung der DNA erfolgt durch eine thermostabile DNA-Polymerase (Taq-Polymerase) in sich wiederholenden Zyklen.
Zunchst wird die DNA bei 94C denaturiert. Anschlieend erfolgt die Anlagerung (Annealing) der Oligonukleotide an die einzelstrngige DNA bei den fr die Oligonukleotide jeweils spezifischen Annealing-Temperaturen. Danach wird durch die DNA-Polymerase mit Hilfe der Desoxynukleotidtriphosphate ein komplementrer DNA-Strang bei 72C synthetisiert (Elongation). Anschlieend erfolgt wieder eine Denaturierung bei 94C und der Zyklus wiederholt sich. Bei jedem dieser Zyklen kann somit die Anzahl der Amplifikate verdoppelt werden. Nach Ablauf des letzten Zyklus erfolgt eine finale Elongation bei 72C und anschlieend das Abkhlen auf 4C.
Die PCR diente zum einen dem Nachweis der parvoviralen DNA, zum anderen der Herstellung von PCR-Amplifikaten, die zur vollstndigen Sequenzierung des VP2-Gens erforderlich waren.
Die optimalen Zyklusbedingungen fr die Oligonukleotide M1RE+M2RE sind in Tabelle 3 aufgefhrt. Die optimale Annealing-Temperatur bei den brigen Oligonukleotiden betrug 54C. Die weiteren Parameter des Zyklus wurden bernommen.
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 3: Zyklusbedingungen fr die Oligonukleotide M1RE+M2RE
PhaseTemperaturZeitZyklenzahl1.Denaturierung94C5min2.Denaturierung94C30s3.Annealing59C30s35 x4.Elongation72C1min5.finale Elongation72C10min6.khlen4C(
Die Menge je Reaktionsansatz betrug 25(l. Je Reaktion wurde 1,5(l Template und jeweils ein Oligonukleotidpaar in einer Konzentration von 200nM eingesetzt. Es wurde entweder der PCR Master Mix (1.1x ReddyMix( ABgene House, Surrey, UK) oder der Taq PCR Core Kit (Qiagen, Hilden) fr die PCR Reaktion verwendet. Die genauen Mengen- und Konzentrationsangaben sind in Tabelle 4 und 5 wiedergegeben.
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 4: Reaktionskomponenten des PCR Master Mix mit Volumen und Konzentrationsangaben
ReagenzienBestandteile PCR Master MixVolumen (in (l)Konzentrationen in 25(l ReaktionsansatzPCR MasterMix*22,5DNA Polymerase0,625 unitsTris-HCL75mM(NH4)2SO420mMMgCl22,5mMTween( 200,01%dNTP0,2mM 1)Primer f0,5200nMPrimer r0,5200nM* enthlt 2,5mM MgCl2, Laufpuffer
1) fr jedes dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 5: Reaktionskomponenten des Taq PCR Core Kit mit Volumen und Konzentrationsangaben
ReagenzienVolumen (in (l)Konzentration in 25(l ReaktionsansatzQiagen PCR Puffer* (Tris Cl, KCL, (NH4)2SO4,)2,5 Q-Solution2,5MgCl2 1)32,25mM 2)dNTP (1:3 verdnnt)2200(M 3)Destilliertes Wasser11,4-Primer f1400nMPrimer r1400nMTaq DNA Polymerase0,10,5 units*enthlt 15 mM MgCl2, pH 8,7
Fr jedes Oligonukleotidpaar wurde ein Versuchsansatz in einem Reaktionsgef hergestellt und das Oligonukleotidpaar hinzugefgt. Anschlieend wurden rumlich getrennt dazu die Gefe fr die PCR-Reaktion mit 23,5(l pro Gef befllt und die Proben hinzupipettiert. Die einzelnen Reagenzien sowie die Reaktionsanstze wurden dabei immer auf Eis gehalten. Bei jeder PCR-Reaktion wurde eine Positiv- und eine Negativkontrolle mitgefhrt. Als Positivkontrolle diente der aufgereinigte Zellkulturberstand des Isolats CPV-d.
Die PCR-Reaktionen fanden im Eppendorf Mastercycler(gradient (Firma Eppendorf, Hamburg) statt.
Optimierung der PCR
Die optimalen Zyklusbedingungen sowie die Sensitivitt der PCR fr die Oligonukleotide M1RE+M2RE und die weiteren in Tabelle 2 aufgefhrten Oligonukleotide wurden experimentell ermittelt. Dazu wurde eine Verdnnungreihe von 10-4 bis 10-12 fr die Oligonukleotide M1RE+M2RE mit einem Plasmid, das ein partielles VP2-Gen (891bp) von einem CPV-Isolat enthlt, angefertigt. Fr die weiteren Oligonukleotide wurde eine 10-3 bis 10-6 Verdnnung des aufgereinigten Zellkulturberstandes des Isolats CPV-d benutzt. Mit Hilfe eines Gradientencyclers (Eppendorf Mastercycler(gradient, Firma Eppendorf, Hamburg) wurden die optimalen Annealing-Temperaturen fr die Oligonukleotide ermittelt. Die PCR-Produkte wurden dazu auf ein 2%iges Agarosegel aufgetragen und nach Frbung im Ethidiumbromidbad visuell ausgewertet.
Agarose-Gel-Elektrophorese
Die Gelelektrophorese wurde eingesetzt, um die PCR-Produkte nachzuweisen. Sie basiert darauf, dass Nukleinsuren bei einem neutralen pH aufgrund ihrer Phosphatgruppen polyanionisch sind und bei angelegter Spannung in der Gelelektrophoreseapparatur in Richtung Anode wandern. Die Nukleinsuremolekle werden durch eine Gelmatrix, die aus einem Agarosegel besteht, entsprechend ihrer Gre aufgetrennt. Mit steigender Konzentration des Gels knnen immer kleinere DNA-Fragmente auch mit nur wenigen hundert Basenpaaren aufgetrennt und nachgewiesen werden.
Der Nachweis der PCR-Produkte erfolgte mit 2%igen Agarosegelen. Zur Herstellung des Agarosegels wurden 2g Agarosepulver in 100 ml TBE Laufpuffer gelst, in der Mikrowelle erhitzt und anschlieend in einen Geltrger gegossen. Nach Erstarren der Agarose wurde das Gel in die mit TBE gefllte Elektrophoresekammer (Firma Peqlab Biotechnologie GmbH, Erlangen) gelegt. Die Zusammensetzung des Laufpuffers und die des Agarosegels sind detailliert im Anhang aufgefhrt.
Es wurden jeweils 8(l der PCR-Produkte, sowie der Positiv- und Negativkontrollen in die Kavitten des Agarosegels pipettiert. Zur Grenbestimmung der Amplifikate wurde 4(l des Molekulargewichtsmarkers (PeqGold 50 bp DNA-Leiter, Firma Peqlab Biotechnologie GmbH, Erlangen) aufgetragen. Da der Taq PCR Core Kit (Qiagen, Hilden) keinen Laufpuffer enthlt, wurde zu 8(l der PCR-Amplifikate je 1,5(l Ladepuffer (Firma Peqlab Biotechnologie GmbH, Erlangen) zugesetzt und die gesamte Menge in die Kavitten des Gels pipettiert.
An der Elektrophoresekammer wurde mit einem Netzgert (Powerpack 200(, Bio-Rad Laboratories, Hercules, USA) eine Spannung von 140 V fr 60 min angelegt. Anschlieend wurde das Gel mit dem interkalierenden Fluoreszenzfarbstoff Ethidiumbromid (Ethidiumbromid-Lsung 1%, Firma AppliChem GmbH, Darmstadt) fr ca. 10 bis 15 Minuten angefrbt. Die Konzentration des Ethidiumbromidbades betrug 0,5(g/ ml. Durch Einlagerung des Ethidiumbromids in die DNA kann diese unter UV-Licht (Wellenlnge 460nm) als Banden sichtbar gemacht werden. Zur Visualisierung und zum Fotografieren wurde das Geldokumentationssystem Gel Doc( 2000 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, USA) und die Software Bio Rad( Quantity One- 4.0.3. (Bio Rad Laboratories, Herkules, USA) benutzt.
Klonieren der PCR-Amplifikate in Escherichia coli
In Einzelfllen wurden die amplifizierten PCR-Produkte mit Hilfe des TOPO TA Cloning(-Kits (Firma Invitrogen, Karlsruhe) kloniert. Es wurden PCR-Produkte entweder direkt aus dem Reaktionsansatz oder ausgeschnitten aus einem 2%igen TAE-Gel verwendet. Die Aufreinigung im letzteren Fall erfolgte mittels QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen, Hilden). Die Insertion der DNA-Fragmente in den pCR( 2.1-Vektor erfolgte gem den Angaben des Herstellers. Anschlieend wurden die Plasmide in TOP10F (E.coli)-Bakterien transformiert. Gem Herstellerangaben erfolgte die Blau-Wei-Selektion der Klone mit inseriertem PCR-Produkt auf LB-Z-Nhrbden mit Ampicillin. Die genaue Zusammensetzung ist im Anhang aufgefhrt. Nach Aufschtteln der Klone in LB-Bouillon (Sigm(, LB Broth, Miller, Luria Bertani) fr 6-8 Stunden erfolgte die Aufreinigung der Plasmid-DNA mit Hilfe des QIAprep Miniprep Kit (Qiagen, Hilden).
Zur Kontrolle, ob das gewnschte PCR-Produkt tatschlich in dem Plasmidvektor enthalten ist, wurde vor der Sequenzierung ein Restriktionsverdau mit dem Restriktionsenzym EcoRI (New England BioLabs( GmbH, Frankfurt a.M.) in einer Konzentration von 100000 U/ml durchgefhrt. Das insert, das bei dem verwendeten Vektor von EcoRI-Schnittstellen flankiert ist, kann somit aus dem Plasmid geschnitten werden.
Verdau: Plasmid 4(l
EcoRI 2(l
EcoRI Puffer 4(l
Destilliertes Wasser 30(l
Nach 2 Stunden Inkubation bei 37C erfolgte der Nachweis der erwarteten Gre des inserts mit Hilfe der Gelelektrophorese (2%iges Agarosegel, 140 V, 60 min.).
Aufreinigung der PCR-Produkte
Die in der PCR amplifizierten DNA-Fragmente wurden fr die folgende Sequenzierung mit Hilfe des QIAquick( PCR Purification Kit (Qiagen, Hilden) aufgereinigt. Die Aufreinigung erfolgte gem den Angaben des Herstellers. Die DNA-Fragmente werden dabei an eine Silicagel-Membran gebunden. Die restlichen noch enthaltenen Bestandteile der PCR wie Oligonukleotide, dNTP, Pufferionen und DNA-Polymerase wurden mit Hilfe eines Waschschrittes entfernt. Die Elution erfolgte mit einem Elutionspuffer. Anschlieend wurden die Proben an das IZKF-Leipzig (IZKF- Interdisziplinres Zentrum fr klinische Forschung der Universitt Leipzig) weitergeleitet.
Sequenzierung der PCR-Amplifikate
Die Nukleotidsequenzen wurden durch das IZKF Leipzig (IZKF- Interdisziplinres Zentrum fr klinische Forschung der Universitt Leipzig) ermittelt. Die Bestimmung erfolgte nach der Kettenabbruchmethode nach Sanger ADDIN REFMGR.CITE Sanger19774DNA sequencing with chain-terminating inhibitorsJournal4DNA sequencing with chain-terminating inhibitorsSanger,F.Nicklen,S.Coulson,A.R.1977/12analysisantagonists & inhibitorsBase SequenceColiphagesDeoxyribonucleotidesDnaDNA Polymerase IDNA Restriction EnzymesDna,ViralmetabolismmethodspharmacologyNot in File54635467Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A7412pdf jaPM:271968Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1(SANGER et al. 1977). Prinzip dieser Methode ist es, dass es durch Einbau von Didesoxy-Nukleotiden zum Abbruch der Polymerisationsreaktion kommt. Dabei verluft die Polymerisationsreaktion in vier getrennten Anstzen mit jeweils den vier Nukleotid-Monomeren und der Didesoxy-Variante einer Nukleotidsorte. Der Start der Polymerisationsreaktionen ist bei allen Strngen gleich und wird durch ein Oligonukleotid, das als Primer dient, vorgegeben. Die Kettenverlngerung luft solange ab, bis schlielich ein Didesoxy-Nukleotid eingebaut wird und damit die 3-OH-Gruppe zur Ausbildung der Phosphodiesterbindung zum nchsten Kettenglied fehlt. Da der Anfangspunkt festgelegt ist, spiegelt die Lnge der Synthesefragmente in einem Reaktionsansatz die relative Position der jeweiligen Nukleobasenorte im Molekl wider. Die Auftrennung der vier Anstze nebeneinander entsprechend ihrer Gre in einem Acrylamidgel ermglicht das Ablesen der Basensequenz direkt vom Gel.
Die Nukleotide wurden vom IZKF mit Fluoreszenzfarbstoffen markiert. Die Probenvorbereitung erfolgte mit dem Big Dye( Terminator v. 3.1. Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Fr die PCR-Reaktion wurde das 16 Kapillargert ABI Prism( 3100 Genetic Analyzer C (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) eingesetzt. Die Auswertung der Daten erfolge mit Hilfe der dazugehrigen Software DNA Sequencing analysis 5.1. (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA).
Bearbeitung und Analyse der Sequenzen
Die vom IZKF ermittelten Sequenzen wurden zunchst mit dem Programm BLAST ADDIN REFMGR.CITE Altschul19975Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programsJournal5Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programsAltschul,S.F.Madden,T.L.Schaffer,A.A.Zhang,J.Zhang,Z.Miller,W.Lipman,D.J.1997/9/1AlgorithmsAmino Acid SequenceAnimalschemistryDatabases,FactualDnaHumansMolecular Sequence DataProteinsResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence AlignmentSoftwareNot in File33893402Nucleic Acids Res.2517pdf ja teilw.National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, National Institutes of Health, Bethesda, MD 20894, USA. altschul@ncbi.nlm.nih.govPM:9254694Nucleic Acids Res.1(ALTSCHUL et al. 1997) hinsichtlich ihrer Spezifitt berprft. Die Analyse und Bearbeitung erfolgte im Anschluss mit den Programmen Chromas( (Technelysium Ltd, Tewantin Qld) und der Sofware LASERGENE( (DNASTAR Inc., Madison, Wisconsin).
Phylogenetische Untersuchungen wurden in einem Alignment der ermittelten Sequenzen mit verschiedenen in der Genbank verffentlichten Sequenzen (Tab.6) von FPV-, CPV-, MEV-, RPV-, RDPV- und BFPV- Isolaten nach der clustal W-Methode ADDIN REFMGR.CITE Thompson19941CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choiceJournal1CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choiceThompson,J.D.Higgins,D.G.Gibson,T.J.1994/11/11AlgorithmsAmino Acid SequencechemistryComparative StudygeneticsGlobinsmethodsMolecular Sequence DataProtein Structure,SecondaryProteinsSensitivity and SpecificitySequence AlignmentSoftwareNot in File46734680Nucleic Acids Res.2222pdf jaEuropean Molecular Biology Laboratory, Heidelberg, GermanyPM:7984417Nucleic Acids Res.1(THOMPSON et al. 1994) und mit Hilfe von Stammbumen, die mit dem Programm PAUP (Swofford, D.L. 1998, PAUP, Phylogenetic Analysis Using Parsimony, Version 4.0b, Sinauer Associates, Sunderland, Massachusetts) erstellt wurden, durchgefhrt.
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 6: Viursisolate mit Angabe der Genbank-Nummern, Referenz, Herkunft und Jahr der Isolierung
Genbank-Nr.VirusisolatReferenzIsolierung (Jahr)HerkunftAB000056FPlV-ObihiroHoriuchi,M.; direct submission 19961974JAPANAB000068FPLV-tu4Horiuchi,M.; direct submission 19961975JAPANAB000066FPLV-tu2Horiuchi,M.; direct submission 19961975JAPANAB000064FPLV-tu12Horiuchi,M.; direct submission 19961979JAPANAB000061FPLV-Som4Horiuchi,M.; direct submission 19961995JAPANAB000059FPLV-Som1Horiuchi,M.; direct submission 19961994JAPANAB000052FPLV-A04Horiuchi,M.; direct submission 19961994JAPANM24002FPV-a (Philips Roxane) ADDIN REFMGR.CITE Parrish1988102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesJournal102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesParrish,C.R.Aquadro,C.F.Carmichael,L.E.1988/10Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidComparative StudyDnaDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentHemagglutinins,ViralimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusRecombination,GeneticRepetitive Sequences,Nucleic AcidResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File293307Virology1662James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, IthacaPM:3176341Virology1(PARRISH et al. 1988b)1962U.K.aM24004FPV-b CU4 ADDIN REFMGR.CITE Parrish1988102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesJournal102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesParrish,C.R.Aquadro,C.F.Carmichael,L.E.1988/10Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidComparative StudyDnaDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentHemagglutinins,ViralimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusRecombination,GeneticRepetitive Sequences,Nucleic AcidResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File293307Virology1662James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, IthacaPM:3176341Virology1(PARRISH et al. 1988b)1967U.S.bU22187FPV-23 ADDIN REFMGR.CITE Truyen19952Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal2Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDnaDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinephysiologyProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698pdf jaJames A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(TRUYEN et al. 1995a)1990U.S.U22189FPV-d ADDIN REFMGR.CITE Truyen199551Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal51Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMinkMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinePhylogenyphysiologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(TRUYEN et al. 1995e)(1964U.S.X55115FPV-193 ADDIN REFMGR.CITE Martyn1990108Nucleotide sequence of feline panleukopenia virus: comparison with canine parvovirus identifies host-specific differencesJournal108Nucleotide sequence of feline panleukopenia virus: comparison with canine parvovirus identifies host-specific differencesMartyn,J.C.Davidson,B.E.Studdert,M.J.1990/11Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCapsidCapsid ProteinschemistryComparative StudyDnaDna,ViralDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenesGenes,ViralgeneticsmicrobiologyMolecular Sequence DataNucleic Acid ConformationParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinePlasmidsProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tRestriction MappingSequence Homology,Nucleic AcidVariation (Genetics)veterinaryNot in File27472753J.Gen.Virol.71 ( Pt 11)School of Veterinary Science, University of Melbourne, Parkville, Victoria, AustraliaPM:2174965J.Gen.Virol.1(MARTYN et al. 1990)1970AUSTRALIENM10824FPV-Carlson ADDIN REFMGR.CITE Carlson198511Cloning and sequence of DNA encoding structural proteins of the autonomous parvovirus feline panleukopenia virusJournal11Cloning and sequence of DNA encoding structural proteins of the autonomous parvovirus feline panleukopenia virusCarlson,J.Rushlow,K.Maxwell,I.Maxwell,F.Winston,S.Hahn,W.1985/9Amino Acid SequenceanalysisBase SequenceCloning,MolecularComparative StudyDeoxyribonucleasesDnaDna,ViralFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGene Expression RegulationGenesgeneticsmetabolismMice Minute VirusParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinePlasmidsProteinsViral ProteinsViral Structural ProteinsNot in File574582J.Virol.553pdf jaPM:2991581J.Virol.1(CARLSON et al. 1985)1966U.S.U22188FPV-377 ADDIN REFMGR.CITE Truyen19952Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal2Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDnaDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinephysiologyProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698pdf jaJames A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(TRUYEN et al. 1995a)1993DEUTSCHLANDAY742934CPV-447 ADDIN REFMGR.CITE Shackelton2005104High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusJournal104High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusShackelton,L.A.Parrish,C.R.Truyen,U.Holmes,E.C.2005/1/11AnimalsBase SequenceCapsidclassificationDnaDogsEvolutionFeline PanleukopeniageneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,CaninePhylogenyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Selection (Genetics)Not in File379384Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1022pdf jaDepartment of Zoology, University of Oxford, South Parks Road, Oxford OX1 3PS, United KingdomPM:15626758Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1(SHACKELTON et al. 2005e)1995DEUTSCHLANDAY742935CPV-U6 ADDIN REFMGR.CITE Shackelton2005104High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusJournal104High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusShackelton,L.A.Parrish,C.R.Truyen,U.Holmes,E.C.2005/1/11AnimalsBase SequenceCapsidclassificationDnaDogsEvolutionFeline PanleukopeniageneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,CaninePhylogenyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Selection (Genetics)Not in File379384Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1022pdf jaDepartment of Zoology, University of Oxford, South Parks Road, Oxford OX1 3PS, United KingdomPM:15626758Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1(SHACKELTON et al. 2005e)1995DEUTSCHLANDAY869724CPV-Taichung ADDIN REFMGR.CITE Wang200518Phylogenetic Analysis of Canine Parvovirus VP2 Gene in TaiwanJournal18Phylogenetic Analysis of Canine Parvovirus VP2 Gene in TaiwanWang,H.C.Chen,W.D.Lin,S.L.Chan,J.P.Wong,M.L.2005/10Amino Acid SequenceanalysisDnaParvovirusPolymerase Chain ReactionveterinaryNot in File171174Virus Genes312pdf jaDepartment of Veterinary Medicine, College of Veterinary Medicine, National Chung-Hsing University, 402, Taichung, Taiwan, mlwong@dragon.nchu.edu.twPM:16025242Virus Genes1(WANG et al. 2005)2003/04TAIWANM74849CPV-39 Parrish,C.R. direct submission 19911984U.S.M24003CPV-15 ADDIN REFMGR.CITE Parrish1988102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesJournal102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesParrish,C.R.Aquadro,C.F.Carmichael,L.E.1988/10Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidComparative StudyDnaDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentHemagglutinins,ViralimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusRecombination,GeneticRepetitive Sequences,Nucleic AcidResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File293307Virology1662James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, IthacaPM:3176341Virology1(PARRISH et al. 1988b)1984U.S.M38245CPV-d ADDIN REFMGR.CITE Parrish1991103Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and feline panleukopenia virus using infectious plasmid clonesJournal103Mapping specific functions in the capsid structure of canine parvovirus and feline panleukopenia virus using infectious plasmid clonesParrish,C.R.1991/7analysisAnimalsBase SequenceCapsidCatsCell LineCloning,MolecularDnaDna,ViralDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsimmunologyisolation & purificationMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusParvovirus,FelinePlasmidsRecombination,GeneticResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.ultrastructureveterinaryNot in File195205Virology1831James A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853PM:1647068Virology1(PARRISH 1991c)1978U.S.NC_001539CPV-Norden ADDIN REFMGR.CITE Reed1988105Nucleotide sequence and genome organization of canine parvovirusJournal105Nucleotide sequence and genome organization of canine parvovirusReed,A.P.Jones,E.V.Miller,T.J.1988/1Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCapsidCloning,Moleculardiagnostic useDnaDNA Restriction EnzymesDna,ViralDogsGenes,ViralgeneticsmicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusProtein ConformationProteinsViral ProteinsNot in File266276J.Virol.621pdf jaDepartment of Molecular Genetics, SmithKline Beckman Corporation, Swedeland, Pennsylvania 19406PM:2824850J.Virol.1(REED et al. 1988)1978U.S.M24000CPV-31 ADDIN REFMGR.CITE Parrish1988102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesJournal102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesParrish,C.R.Aquadro,C.F.Carmichael,L.E.1988/10Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidComparative StudyDnaDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentHemagglutinins,ViralimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusRecombination,GeneticRepetitive Sequences,Nucleic AcidResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File293307Virology1662James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, IthacaPM:3176341Virology1(PARRISH et al. 1988b)1983U.S.M74852CPV-133Parrish, C.R.; direct submission 19911990U.S.AJ002928CPV-Pudel ADDIN REFMGR.CITE Truyen1998107No evidence for a role of modified live virus vaccines in the emergence of canine parvovirusJournal107No evidence for a role of modified live virus vaccines in the emergence of canine parvovirusTruyen,U.Geissler,K.Parrish,C.R.Hermanns,W.Siegl,G.1998/5AnimalsBase SequenceCapsidCapsid ProteinsCatsclassificationDnaDna,ViralDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenesgeneticsGermanyimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelineProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tVaccines,AttenuatedViral VaccinesvirologyNot in File11531158J.Gen.Virol.79 ( Pt 5)pdf jaInstitute for Medical Microbiology, Ludwig Maximillians University, Munich, Germany. Uwe.Truyen@LRZ.uni-muenchen.dePM:9603330J.Gen.Virol.1(TRUYEN et al. 1998b)1979DEUTSCHLANDAJ002927CPV-ChowChow ADDIN REFMGR.CITE Truyen1998107No evidence for a role of modified live virus vaccines in the emergence of canine parvovirusJournal107No evidence for a role of modified live virus vaccines in the emergence of canine parvovirusTruyen,U.Geissler,K.Parrish,C.R.Hermanns,W.Siegl,G.1998/5AnimalsBase SequenceCapsidCapsid ProteinsCatsclassificationDnaDna,ViralDogsEvolutionFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenesgeneticsGermanyimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridae InfectionsParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelineProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tVaccines,AttenuatedViral VaccinesvirologyNot in File11531158J.Gen.Virol.79 ( Pt 5)pdf jaInstitute for Medical Microbiology, Ludwig Maximillians University, Munich, Germany. Uwe.Truyen@LRZ.uni-muenchen.dePM:9603330J.Gen.Virol.1(TRUYEN et al. 1998b)1979DEUTSCHLANDU22186CPV-128 ADDIN REFMGR.CITE Truyen19952Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal2Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDnaDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinephysiologyProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698pdf jaJames A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(TRUYEN et al. 1995a)1979U.S.D26079CPV-Y1 ADDIN REFMGR.CITE Horiuchi199410Mapping of determinants of the host range for canine cells in the genome of canine parvovirus using canine parvovirus/mink enteritis virus chimeric virusesJournal10Mapping of determinants of the host range for canine cells in the genome of canine parvovirus using canine parvovirus/mink enteritis virus chimeric virusesHoriuchi,M.Goto,H.Ishiguro,N.Shinagawa,M.1994/6Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCapsidCell LinechemistryDnaDNA PrimersDNA,RecombinantDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGene Expression Regulation,ViralGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentmicrobiologyMinkMolecular Sequence DataMutagenesis,Site-DirectedOpen Reading FramesParvovirusParvovirus,CanineParvovirus,FelinePlasmidsProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tSequence Homology,Amino AcidSequence Homology,Nucleic AcidveterinaryViral Structural ProteinsVirus ReplicationNot in File13191328J.Gen.Virol.75 ( Pt 6)Department of Veterinary Public Health, Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine, Hokkaido, JapanPM:8207398J.Gen.Virol.1(HORIUCHI et al. 1994)1982JAPANU22193RD-87 ADDIN REFMGR.CITE Truyen19952Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal2Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDnaDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinephysiologyProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698pdf jaJames A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(TRUYEN et al. 1995a)1987FINNLANDD00765MEV-Abashiri ADDIN REFMGR.CITE Kariatsumari1991106Construction and nucleotide sequence analysis of an infectious DNA clone of the autonomous parvovirus, mink enteritis virusJournal106Construction and nucleotide sequence analysis of an infectious DNA clone of the autonomous parvovirus, mink enteritis virusKariatsumari,T.Horiuchi,M.Hama,E.Yaguchi,K.Ishigurio,N.Goto,H.Shinagawa,M.1991/4Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidCell LineCloning,MolecularComparative StudyDnaDNA ReplicationDna,ViralFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusgeneticsisolation & purificationmethodsMinkMolecular Sequence DataNucleic Acid ConformationOligonucleotide ProbesOpen Reading FramesParvoviridaeParvoviruspathogenicityPlasmidsRestriction MappingSequence Homology,Nucleic AcidTransfectionveterinaryNot in File867875J.Gen.Virol.72 ( Pt 4)Department of Veterinary Public Health, Faculty of Veterinary Medicine, Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine, Hokkaido, JapanPM:2016597J.Gen.Virol.1(KARIATSUMARI et al. 1991)1978JAPANU22191MEV-e ADDIN REFMGR.CITE Truyen19952Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal2Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDnaDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinephysiologyProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698pdf jaJames A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(TRUYEN et al. 1995a)1965U.S.M23999MEV-a ADDIN REFMGR.CITE Parrish1988102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesJournal102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesParrish,C.R.Aquadro,C.F.Carmichael,L.E.1988/10Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidComparative StudyDnaDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentHemagglutinins,ViralimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusRecombination,GeneticRepetitive Sequences,Nucleic AcidResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File293307Virology1662James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, IthacaPM:3176341Virology1(PARRISH et al. 1988b)1973U.S.M24001MEV-b ADDIN REFMGR.CITE Parrish1988102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesJournal102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesParrish,C.R.Aquadro,C.F.Carmichael,L.E.1988/10Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidComparative StudyDnaDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentHemagglutinins,ViralimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusRecombination,GeneticRepetitive Sequences,Nucleic AcidResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File293307Virology1662James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, IthacaPM:3176341Virology1(PARRISH et al. 1988b)1975U.S.U22190MEV-d ADDIN REFMGR.CITE Truyen19952Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal2Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDnaDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinephysiologyProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698pdf jaJames A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(TRUYEN et al. 1995a)(1965U.K.U22185BFPV-1 ADDIN REFMGR.CITE Truyen19952Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoJournal2Evolution of the feline-subgroup parvoviruses and the control of canine host range in vivoTruyen,U.Gruenberg,A.Chang,S.F.Obermaier,B.Veijalainen,P.Parrish,C.R.1995/8Amino Acid SequenceAnimalsBase SequenceCarnivoraCatsDnaDna,ViralDog DiseasesDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataMutationParvovirusParvovirus,FelinephysiologyProteinsResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.veterinaryViral Nonstructural ProteinsViral Structural ProteinsvirologyVirus ReplicationNot in File47024710J.Virol.698pdf jaJames A. Baker Institute for Animal Health, New York State College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca 14853, USAPM:7609035J.Virol.1(TRUYEN et al. 1995a)1983FINNLANDM24005Raccoon ADDIN REFMGR.CITE Parrish1988102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesJournal102Canine host range and a specific epitope map along with variant sequences in the capsid protein gene of canine parvovirus and related feline, mink, and raccoon parvovirusesParrish,C.R.Aquadro,C.F.Carmichael,L.E.1988/10Amino Acid SequenceanalysisAnimalsBase SequenceCapsidComparative StudyDnaDogsFeline PanleukopeniaFeline panleukopenia virusGenes,Viralgeneticsgrowth & developmentHemagglutinins,ViralimmunologymicrobiologyMolecular Sequence DataParvoviridaeParvovirusRecombination,GeneticRepetitive Sequences,Nucleic AcidResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Species SpecificityveterinaryVirus ReplicationNot in File293307Virology1662James A. Baker Institute, New York State College of Veterinary Medicine, IthacaPM:3176341Virology1(PARRISH et al. 1988b)1979U.S.a: United Kingdom
b: United States
Tierartspezifische PCR
Die tierartspezifische PCR wurde vom Tierrztlichen Institut der Georg-August-Universitt in Gttingen durchgefhrt. Eine Probe wurde mit 7 katzenspezifischen Mikrosatelliten als Marker (FCA26, FCA43, FCA58, FCA88, FCA90, FCA 126, FCA132) und 11 hundespezifischen Markern (PEZ1;FHC5054; FHC2010; PEZ5; PEZ12; PEZ6; PEZ8; FHC2079; FH2247; FH2164; FH2001) untersucht.
Immunhistochemie
Der immunhistochemische Nachweis von felinen / caninen Parvoviren einer Probe wurde am Institut fr Pathologie der Stiftung Tierrztliche Hochschule Hannover durchgefhrt. Dabei wurden folgende Antikrper benutzt:
Maus-anti-Parvovirus: CPV1-2A1 (von Chris Grant, Ph.D., D.Sc., 813 Harbor BLV #284), Balb/C Museascites (BioLogo, Kronshagen)
Biotinyliertes Ziege-anti-Maus-Serum: GAM-b IgG (H+L) (Vector Laboratories, Petersborough, U.K.).
Ergebnisse
Probenauswahl
Im Rahmen dieser Arbeit wurden in Befundordern des Instituts fr Pathologie der Stiftung Tierrztliche Hochschule Hannover in den Jahren von 1970 bis 1980 nach den in Punkt 3.1.1 genannten Auswahlkriterien 493 Flle ermittelt. Dabei handelte es sich um 208 Katzen und 250 Hunde sowie 35 Flle anderer Karnivoren, die fr eine Untersuchung in Frage kamen.
Jahrgangsweise wurden maximal jeweils 10 Hunde- und 10 Katzenproben ausgewhlt. 1973 wurden alle Hundeproben untersucht, da eine als Hundeprobe gekennzeichnete Probe positiv war. Die Paraffinblcke der Proben wurden im Archiv herausgesucht und gekennzeichnet. Zustzlich wurden aus dem Jahr 1967 zwei Nerzproben, dem Jahr 1972 eine Wolfprobe, dem Jahr 1973 eine Nerz- und aus dem Jahr 1974 zwei Waschbrproben untersucht.
Eine detaillierte Auffhrung der ausgewhlten Proben findet sich in Tabelle 11 und 12 im Anhang. Insgesamt wurden 204 Proben untersucht.
Sensitivitt der PCR
Zur Bestimmung der Sensitivitt der PCR mit den Oligonukleotiden M1RE+M2RE wurde ein in TE-Puffer gelstes Plasmid, welches das partielle VP2-Gen (891 bp) eines CPV-Isolates enthielt, verwendet. Die Verdnnung erfolgte mit destilliertem Wasser in Verdnnungsstufen von 10-4 bis 10-12. Nach Messung der optischen Dichte bei 260nm wurde die Kopienzahl als Genomquivalente nach folgender Formel bestimmt: Eine Einheit OD260 entspricht einer Konzentration von 50(g/ml. Ein Nukleotidbasenpaar weist ein Molekulargewicht von 660pg/pmol auf. Daraus resultierte fr das verwendete Plasmid (4822 bp) ein Molekulargewicht von 3,2 x 106 g/mol. Fr die PCR ergab sich demnach eine Nachweisgrenze von 10 bis 100 Kopien pro Reaktionsansatz. Die Bestimmung der optimalen Annealing-Temperatur erfolgte mit Hilfe eines Gradientencyclers (Eppendorf Mastercycler(gradient, Firma Eppendorf, Hamburg) und wurde bei 59C festgelegt. Die Annealing-Temperatur wurde so gewhlt, dass der Nachweis einer spezifischen Bande mglich war. Zur Bestimmung der Sensitivitt der Polymerase-Kettenreaktionen der weiteren in Tabelle 2 genannten Oligonukleotide wurde der mit dem QIAamp( DNA Mini Kit (Qiagen, Hilden) aufgereinigte Zellkulturberstand des Isolats CPV-d eingesetzt. Im Vergleich mit der Sensitivitt der PCR mit den Oligonukleotiden M1RE+M2RE war der Unterschied in der Sensitivitt nicht mehr als um den Faktor 100 geringer. Die optimale Annealing-Temperatur betrug 54C.
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 7: Verdnnungsreihe der Plasmid-DNA (von 10-4 bis10-13)
Nachweis der parvoviralen DNA
Zum Nachweis der parvoviralen DNA wurde als spezifische und sensitive Nachweismethode die PCR mit den Oligonukleotiden M1RE+M2RE eingesetzt. Diese Oligonukleotide amplifizieren ein Sequenzstck von 240 bp Lnge, das sich in dem Genomabschnitt befindet, der fr das VP2-Strukturprotein kodiert.
Von den insgesamt 198 untersuchten Hunde- und Katzenproben aus den Jahren 1970 bis 1980 konnten 17 positive Hunde- und 64 positive Katzenproben ermittelt werden. Bei den ausgewhlten Proben anderer Karnivoren war als einzige Probe eine Waschbrprobe als positiv zu beurteilen. Die genaue Angabe des Jahres, der Diagnose bzw. des Befundes, des Alters des Tieres, Vorberichts und untersuchten Gewebes der positiven Proben sind in den Tabellen 13, 14 und 15 im Anhang zusammengefasst.
Zur Kontaminationskontrolle wurde bei allen positiven Hundeproben und stichprobenweise bei den Katzenproben Gewebe einer anderen Spezies (Hirsch) untersucht. Die Hirschproben, welche jeweils zwischen den einzelnen Hunde- bzw. Katzenproben entnommen wurden, waren in der PCR mit den Oligonukleotiden M1RE+M2RE negativ.
In Abbildung 8 sind exemplarisch die PCR-Amplifikate der Oligonukleotide M1RE+M2RE von drei Proben dargestellt.
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 8: PCR-Amplifikate der Oligonukleotide M1RE+M2RE
Ergebnisse der PCR zur vollstndigen Sequenzierung des VP2-Gens
Im Rahmen dieser Arbeit stand die Sequenzierung des VP2-Gens im Vordergrund. Es war vor allem von Interesse in diesem Bereich nach Vernderungen im Genom zu suchen, da sich hier die Nukleotidpositionen befinden, die fr die phylogenetisch wichtigen Aminosuren kodieren und von besonderem Interesse bei der Untersuchung der Evolution dieser Parvoviren sind.
Mit den von Steinel et al. (2002) verffentlichen Oligonukleotid-Kombinationen M1+M41, M10+M11 und M13+M14 konnten bei den Proben keine Ergebnisse erzielt werden. Diese Oligonukleotidpaare amplifizieren DNA-Fragmente in der Grenordnung von 538bp (M10+M11), 482bp (M13+M44) und 891bp (M1+M41). Mglicherweise kam es aufgrund der Formalin- und Paraffinbehandlung zu einem erhhten Auftreten von Einzelstrangbrchen, die zur Fragmentierung der DNA fhrten und somit einen Nachweis der DNA-Fragmente in dieser Grenordnung nicht erlaubten ADDIN REFMGR.CITE Dubeau198655Southern blot analysis of DNA extracted from formalin-fixed pathology specimensJournal55Southern blot analysis of DNA extracted from formalin-fixed pathology specimensDubeau,L.Chandler,L.A.Gralow,J.R.Nichols,P.W.Jones,P.A.1986/6analysisDnaDNA Restriction EnzymesFormaldehydeHistological TechniquesHumansisolation & purificationMethylationNucleic Acid HybridizationpharmacologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Time FactorsNot in File29642969Cancer Res.466PM:3009004Cancer Res.1Dubeau198655Southern blot analysis of DNA extracted from formalin-fixed pathology specimensJournal55Southern blot analysis of DNA extracted from formalin-fixed pathology specimensDubeau,L.Chandler,L.A.Gralow,J.R.Nichols,P.W.Jones,P.A.1986/6analysisDnaDNA Restriction EnzymesFormaldehydeHistological TechniquesHumansisolation & purificationMethylationNucleic Acid HybridizationpharmacologyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Time FactorsNot in File29642969Cancer Res.466PM:3009004Cancer Res.1(DUBEAU et al. 1986). Aufgrund dessen wurden die in Tabelle 2 aufgefhrten Oligonukleotide ausgewhlt, die kleinere Fragmente von 150bp bis 250bp amplifizieren.
Fr die vollstndige Sequenzierung des VP2-Gens wurden im Zeitraum von 1970 bis 1978 Polymerase-Kettenreaktionen mit diesen Oligonukleotidpaaren bei allen positiven Hundeproben, 10 Katzenproben und einer Waschbrprobe durchgefhrt. Die vollstndige Sequenzierung der Waschbrprobe war mit diesen Oligonukleotid-Kombinationen nicht mglich. Bei dem untersuchten Gewebe handelte es sich bei allen Proben um Darmgewebe. Die in jeder PCR mitgefhrte Positivkontrolle (aufgereinigter Zellkulturberstand des Isolats CPV-d) wurde ebenfalls vollstndig sequenziert, um eine mgliche Kontamination mit dieser berprfen zu knnen. In Tabelle 7 und 8 sind die untersuchten Proben mit Fall- und Sektionsnummer zusammengefasst. Die Abbildungen 9 und 10 zeigen exemplarisch das Ergebnis einer PCR mit allen Oligonukleotid-Kombinationen einer Hundeprobe.
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 7: Parvovirus-positive Hundeproben (1970-1978)
Jahr*FallSektions-Nr1).1978464S 1111/78455S 772/781977420S 6357/771973281S 5102/731) Sektionsnummern des Instituts fr Pathologie der Stiftung Tierrztliche Hochschule Hannover
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 8: ausgewhlte Parvovirus-positive Katzenproben (1970-1978)
JahrFallSektions-Nr.1978425S 6599/78430S 6757/781977386S 4699/771976363S 2588/761975361S 2503/751974308S 5830/741973277S 4735/731972232S 2664/721971195S 571/711970174S 469/70
Die Waschbrprobe aus dem Jahr 1974 hat die Fallnummer 321 und die Sektionsnummer S43/74.
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 9: PCR-Amplifikate der Oligonukleotidpaare A(f/r), A0(f/r),A1(f/r), A2(f/r), A3(f/r), A4(f/r), B(f/r), B1(f/r) (Hundeprobe 464 aus dem Jahr 1978)
Abbildung SEQ Abbildung \* ARABIC 10: Fortsetzung Abbildung 9; PCR-Amplifikate der Oligonukleotidpaare B1(f/r), B2(f/r), B3(f/r), B4(f/r), B5 (f/r), C(f/r), C1(f/r), M(f/r) (Hundeprobe 464 aus dem Jahr 1978)
Ergebnisse der Immunhistochemie und der tierartspezifischen PCR
Mit dem Antikrper CPV1-2A1 konnte bei der immunhistochemischen Untersuchung der Hundeprobe 281/73 FPV / CPV nachgewiesen werden. Durchgefhrt wurde diese Untersuchung durch das Institut fr Pathologie der Stiftung Tierrztliche Hochschule Hannover.
Die Sequenz dieser Probe stellte sich als typische FPV-Sequenz dar. Am Tierrztlichen Institut der Georg-August-Universitt Gttingen wurde eine Tierartbestimmung dieser Probe durchgefhrt. In allen Systemen konnten die Allelgren bestimmt werden. Es wurde eindeutig festgestellt, dass es sich um Gewebe einer Katze handelt. Die Untersuchung mit 11 hundespezifischen Markern verlief negativ.
Aufgrund dieser Ergebnisse wird die Probe 281 aus dem Jahr 1973 in folgenden Analysen bei den Katzenproben mit aufgefhrt.
Sequenzanalyse
Sequenzierung
Nach Aufreinigung der in Tabelle 7 und 8 aufgefhrten Proben, wurden die Nukleotidsequenzen vom IZKF-Leipzig (IZKF- Interdisziplinres Zentrum fr klinische Forschung der Universitt Leipzig) ermittelt.
Die Sequenzen wurden zunchst mit dem Programm BLAST ADDIN REFMGR.CITE Altschul19975Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programsJournal5Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programsAltschul,S.F.Madden,T.L.Schaffer,A.A.Zhang,J.Zhang,Z.Miller,W.Lipman,D.J.1997/9/1AlgorithmsAmino Acid SequenceAnimalschemistryDatabases,FactualDnaHumansMolecular Sequence DataProteinsResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Sequence AlignmentSoftwareNot in File33893402Nucleic Acids Res.2517pdf ja teilw.National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, National Institutes of Health, Bethesda, MD 20894, USA. altschul@ncbi.nlm.nih.govPM:9254694Nucleic Acids Res.1(ALTSCHUL et al. 1997) berprft. Die anschlieende Bearbeitung wurde mit der Software LASERGENE( (DNASTAR Inc., Madison, Wisconsin) und dem Programm Chromas( (Technelysium Ltd, Tewantin Qld) durchgefhrt. Die Sequenzen der komplementren DNA-Strnge wurden mit dem Programm Chromas( (Technelysium Ltd, Tewantin Qld) miteinander verglichen, wobei eine Besttigung bei zweifelhaften Sequenzergebnissen einzelner Nukleotide jeweils durch den komplementren DNA-Strang erfolgten. Anschlieend wurden die Sequenzen editiert und in einem Alignment berprft.
Die Sequenzen der berlappenden Amplifikate aller Oligonukleotidpaare aus Tabelle 2 wurden zur vollstndigen Sequenz mit einer Lnge von 1755bp zusammengefgt. Diese deckt das VP2-Strukturproteingenom komplett ab.
Sequenzanalyse der Hunde- und Katzenproben
Die ermittelten Sequenzen der positiven Hunde- und Katzenproben wurden mit je einer Bezugssequenz in einem Alignment nach der clustal-W Methode verglichen. Fr die Hundeproben wurde das Alignment mit dem Isolat CPV-d aus dem Jahr 1978, fr die Katzenproben mit dem Isolat FPV-b aus dem Jahr 1967 durchgefhrt. Die Sequenzen der Isolate wurden aus der Genbank bernommen. Die genauen Angaben sind in Tabelle 6 aufgefhrt.
Da sich der Vergleich ausschlielich auf das VP2-Strukturprotein bezog, wurde auch bei den beiden Isolaten jeweils nur die VP2-Sequenz verwendet. Die Gesamtlnge der untersuchten Sequenzen betrug 1755bp.
Der Vergleich der positiven Hundeproben ergab eine 100%ige bereinstimmung mit dem Isolat CPV-d.
Der Vergleich der Katzenproben mit dem Isolat FPV-b ergab dagegen mehrere Nukleotidaustausche bei einzelnen oder auch mehreren Proben. Genaue Angaben dazu sind in Tabelle 9 aufgefhrt. Es sind sowohl kodierende als auch nicht kodierende Nukleotidaustausche in dieser Tabelle erfasst. Die kodierenden Nukleotidaustausche sind im Folgenden kurz aufgefhrt.
Im Vergleich zur Bezugssequenz ist an der NT-Position 694 bei allen Katzenproben statt einem A ein G vorhanden. Daraus ergibt sich an der Aminosurenposition 232 eine nderung von Isoleucin zu Valin. Mit Ausnahme dieser Mutation sind die weiteren kodierenden Nukleotidaustausche nur bei einzelnen Proben vorhanden. Diese finden sich an den NT-Postionen 271 (K361/75 G(T und K363/76 G(A), 274 (K430/78 G(A), 415 (K386/77 G(A) und 1232 (K361/75 A(C). Diese Nukleotidaustausche fhren auf den entsprechenden Aminosurepositionen zu folgenden Vernderungen: 91 A(S (K361/75), 91 A(T (K363/76), 92 V(I (K430/78), 139 V(I (K386/77) und 411 E(A (K361/75).
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 9: Nukleotid- und Aminosurenunterschiede im VP2-Gen aller Katzenproben im Vergleich mit FPV-b
Nukleotid-PositionFPV-bK174 70K195 71K232 72K277 73K281 73K308 74K361 75K363 76K386 77K425 78K430 78Amino-suren-PositionFPV-bK174 70K195 71K232 72K277 73K281 73K308 74K361 75K363 76K386 77K425 78K430 7899GGT--------------------------C------33G--------G--135TTC-----------------T---------------45F-----F-----171GGG--A--A--A--A--A--A--A--A--A--A--A57GGGGGGGGGGGG183ATC--T------------------------------61II----------246GTA-----G---------------------------82V-V---------271GCA-----------------T--A-----------91A------ST---274GTT------------------------------A--92V----------I415GTT------------------------A--------139V--------I--448TTA---------------C-----------------150L-----L-----501AAT--------------------------------C167N----------N585TTG--------A-----------A------------195L--L---L----648AGA-----------------G---------------216R-----R-----694ATAG--G--G--G--G--G--G--G--G--G--G--232IVVVVVVVVVVV699TAT-----C---------------------------233Y-Y---------738ATT-----------------------------A---246I---------I-801TTT-----------C---------------------267F---F-------804TTT-----------------C---------------268F-----F-----810TGC--T--T--T--T--T--T--T--T--T--T--T270CCCCCCCCCCCC855TTG-----------------------------A---285L---------L-871TTAC--C--C--C-----C--C--C--C--C--C--291LLLLL-LLLLLL1041GCG-----------------------A--------A347A-------A--A1092GCG-----------A---------------------364A---A-------1232GAA-------------------C-------------411E------A----1290TTG--------------------------A------430L--------L--1470TGT-----------------C---------------490C-----C-----1521ACG--A-----------A--A--A--A--A-----A507TT---TTTTT-T1572TAT--C--C--------C--C--C--C--C-----C524YYY--YYYYY-Y1710AAA--------------------G------------570K------K----Auf der Grundlage eines Alignments nach clustalW wurde Tabelle 10 erstellt, die die bereinstimmung der Katzenproben untereinander und zu den Isolaten CPV-d und FPV-b zeigen.
In der oberen Hlfte der durch eine Diagonale geteilten Tabelle sind die bereinstimmungen auf Nukleotidebene, in der unteren Hlfte auf Aminosureebene in Prozent dargestellt.
Im Vergleich der Katzenproben mit dem FPV-b Isolat liegt ein Schwankungsbereich der bereinstimmungen auf Nukleotidebene von 99,4 bis 99,7% vor. Abweichungen der Katzenproben untereinander sind von 0,5 bis 0,1% zu verzeichnen, die einer Homologie von > 99,5% entsprechen. Im Vergleich mit dem CPV-d Isolat sind grere Unterschiede vorhanden. Diese liegen zwischen 1,1 und 0,7%. Der Unterschied zwischen den beiden Isolaten beluft sich auf 1%.
Auf Aminosureebene liegt der Schwankungsbereich der bereinstimmungen der Proben zu dem Isolat FPV-b zwischen 99,3% als niedrigsten und 99,7% als hchsten Wert. Die Katzenproben untereinander zeigen Unterschiede zwischen 0,7 und 0,2%. Vergleich der Proben mit dem Isolat CPV-d ergab entsprechend der Unterschiede auf Nukleotidebene grere Unterschiede im Bereich von 2,1 bis 1,7%. Die Isolate untereinander unterscheiden sich auf Aminosureebene um 1,5%.
Auf eine Darstellung der Hundeproben wurde aufgrund der 100%igen bereinstimmung mit dem Isolat CPV-d verzichtet.
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 10: Sequenzbereinstimmungen der Parvovirussequenzen der Katzenproben untereinander sowie mit FPV-b und CPV-d in Prozent
-----FPV-
bCPV-dK174/70K195/71K232/72K277/73K281/73K308/74K361/75K363/76K386/77K425/78K430/78FPV-b-----99.099.699.699.799.799.799.499.499.599.599.799.5CPV-d98.5-----99.199.399.099.099.198.999.099.199.099.099.0K174/7099.798.3-----99.899.899.799.999.799.799.899.899.799.8K195/7199.798.399.8-----99.899.799.899.599.699.799.799.799.7K232/7299.798.399.899.8-----99.899.899.599.799.799.799.899.7K277/7399.798.399.899.899.8-----99.799.599.599.799.699.899.6K281/7399.798.399.899.899.899.8-----99.799.799.899.899.799.8K308/7499.798.399.899.899.899.899.8-----99.599.699.599.599.5K361/7599.397.999.599.599.599.599.599.5-----99.799.699.599.6K363/7699.598.199.799.799.799.799.799.799.5-----99.799.799.8K386/7799.598.199.799.799.799.799.799.799.399.5-----99.699.7K425/7899.798.399.899.899.899.899.899.899.599.799.7-----99.6K430/7899.598.199.799.799.799.799.799.799.399.599.599.7-----
Die phylogenetischen Untersuchungen wurden mit den in Tabelle 6 aufgefhrten Isolaten durchgefhrt. Da sich die Untersuchungen auf das VP2-Strukturprotein beschrnkten, wurde dementsprechend von den einzelnen Isolaten ausschlielich die Sequenz des VP-2 Gens fr das Alignment verwendet. Die Gesamtlnge betrug 1755bp. Ausnahmen bildeten die Isolate CPV-Pudel und CPV-ChowChow, die das VP2-Gen mit einer Lnge von 1593bp nur partiell abdecken. Das Alignment wurde mit der clustal-W Methode durchgefhrt und diente als Grundlage fr die Erstellung phylogenetischer Stammbume auf Nukleotid- und Aminosureebene.
Die phylogenetische Verwandtschaft der einzelnen Insolate und der Proben wurde anhand dieser Stammbume untersucht. Es lassen sich zwei Cluster unterscheiden. Zum einen ein Cluster mit CPV-hnlichen Parvoviren mit Viren von Hund und Marderhund und zum anderen ein Cluster mit FPV-hnlichen Viren von Katze, Nerz und Waschbr. In dem Cluster mit CPV-hnlichen Viren lassen sich zwei Unterkomplexe unterscheiden. Einer beinhaltet den Typ CPV-2, der andere die neueren Typen CPV-2a und 2b. Die untersuchten Sequenzen der positiven Hundeproben ordnen sich in den Unterkomplex des CPV-2 Typs ein.
Bei dem Cluster, der durch die FPV-hnlichen Viren gebildet wird, lsst sich keine eindeutige Bildung von Unterkomplexen erkennen. Die Proben ordnen sich zwischen die einzelnen Sequenzen der FPV-, MEV- und RPV-Isolate ein. Eine zeitliche Einordnung der Proben zu lteren FPV-Isolaten ist nicht zu erkennen.
Diskussion
Der Zeitpunkt der weltweiten Ausbreitung des CPV-2 in den Hundepopulationen in einer Pandemie wird auf das Jahr 1978 datiert. Neuere Studien, die eine groe Zahl von CPV-Sequenzen aus den 1970er Jahren untersuchten, kamen zu den Schluss, dass sich dieses Virus bereits 10 Jahre frher in den caninen Populationen befunden haben musste ADDIN REFMGR.CITE Shackelton20056High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusJournal6High rate of viral evolution associated with the emergence of carnivore parvovirusShackelton,L.A.Parrish,C.R.Truyen,U.Holmes,E.C.2005/1/11AnimalsBase SequenceclassificationDogsEvolutiongeneticsMolecular Sequence DataParvovirus,CaninePhylogenyResearch Support,Non-U.S.Gov'tResearch Support,U.S.Gov't,P.H.S.Selection (Genetics)Not in File379384Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1022Department of Zoology, University of Oxford, South Parks Road, Oxford OX1 3PS, United KingdomPM:15626758Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A1(SHACKELTON et al. 2005a). Ebenso wird angenommen, dass CPV-2a schon einige Jahre frher (ab 1976) zusammen mit CPV-2 in den Populationen existierte. Gesttzt wird diese Annahme unter anderem durch eine Untersuchung aus Griechenland, die retrospektiv in einer Hundeprobe aus dem Jahr 1974 CPV-Antikrper nachwies ADDIN REFMGR.CITE Koptopoulos19869Presence of antibody cross-reacting with canine parvovirus in the sera of dogs from GreeceJournal9Presence of antibody cross-reacting with canine parvovirus in the sera of dogs from GreeceKoptopoulos,G.Papadopoulos,O.Papanastasopoulou,M.Cornwell,H.J.1986/3/22AnimalsAntibodies,ViralComparative StudyCross ReactionsDog DiseasesDogsEnteritisGreeceHemagglutination Inhibition TestsimmunologyNeutralization TestsParvoviridaeRetrospective StudiesveterinaryNot in File332333Vet.Rec.11812PM:3705371Vet.Rec.1(KOPTOPOULOS et al. 1986a). Alle Untersuchungen im Hinblick auf einen mglichen Anzestor des caninen Parvovirus haben bis heute noch zu keinem eindeutigen Ergebnis gefhrt. Gesttzt auf die Annahme, dass CPV vor 1978 in den caninen Populationen vorgekommen sein msste, wurden in dieser Arbeit Gewebeproben aus den Jahren 1970 bis 1978 von Katzen, Hunden und Wildtieren (Waschbr) aus dem pathologischen Archiv des Instituts fr Pathologie der Stiftung Tierrztliche Hochschule Hannover untersucht. Ziel war es, eine mgliche intermedire Form zwischen FPV und CPV in den Proben zu finden und damit einen Anzestor des caninen Parvovirus zu identifizieren.
Nachweismethoden
Die Aufreinigung der paraffineingebetteten Gewebeproben von Hunden und Katzen aus diesem Zeitraum erfolgte mit Xylol und 100%igem Ethanol nach der von Truyen et al. (1994) beschriebenen Methode. Fr eine vollstndige Lyse des Gewebes war es notwendig, die Proben ber Nacht zu inkubieren. Hunde- und Katzenproben wurden jahrgangsweise und getrennt voneinander aufgereinigt. Bei jeder Aufreinigung wurde eine Negativkontrolle mitgefhrt, um eine mgliche Kontamination ausschlieen zu knnen.
Der Nachweis von CPV / FPV in diesen Proben wurde mit Hilfe der PCR durchgefhrt. Die verwendeten Oligonukleotide M1RE und M2RE wurden aus der Studie von STEINEL et al. (2000) bernommen. Nach Etablierung der PCR mit einer ausreichenden Sensitivitt von 10 bis 100 Kopien pro Reaktionsansatz wurden diese fr den Nachweis der parvoviralen DNA in den Proben benutzt. Dieses Oligonukleotidpaar ergibt Amplifikate, die sich innerhalb des VP2-Gens befinden und eine Lnge von 240bp aufweisen. Im Hinblick auf die vollstndige Sequenzierung des VP2-Gens ergaben sich Probleme bei der bernahme weiterer von STEINEL et al. (2000) verwendeten Oligonukleotidpaare, die DNA-Fragmente in der Grenordnung von ca. 500 bis 900bp amplifizieren. Mit diesen waren bei den Proben keine Ergebnisse zu erzielen. Grund dafr kann die Behandlung der Proben mit Formalin und Paraffin bei der Fixierung des Gewebes gewesen sein, die zu einem erhhten Auftreten von Einzelstrangbrchen der parvoviralen DNA gefhrt hat. Zur vollstndigen Sequenzierung des VP2-Gens wurden aus diesem Grund Oligonukleotidpaare erstellt, die kleinere DNA-Fragmente amplifizieren (150bp bis 250bp). Bei allen positiven Hundeproben und einigen ausgewhlten positiven Katzenproben konnte mit diesen 15 Oligonukleotidpaaren das vollstndige VP2-Gen amplifiziert und sequenziert werden. Bei einer positiven Waschbrprobe war es allerdings mit diesen Oligonukleotiden nicht mglich, die vollstndige Sequenz zu ermitteln.
Bei allen Polymerase-Kettenreaktionen wurden sowohl Positiv- (aufgereinigter Zellkulturberstand des Isolats CPV-d) als auch Negativkontrollen mitgefhrt. Die Negativkontrollen, die bei der Aufreinigung der Proben und bei der Herstellung der Versuchsanstze fr die PCR mitgefhrt wurden, waren bei allen Durchlufen negativ, so dass eine Kontamination whrend dieser Arbeitsschritte ausgeschlossen werden konnte. Als Kontrolle einer mglichen Kontamination whrend der Probennahme mit Hilfe des Schlittenmicrotoms wurden zwischen den einzelnen Proben Paraffinschnitte eines Gewebes einer anderen Spezies (Hirsch) entnommen. Diese Proben wurden bei allen positiven Hundeproben und stichprobenweise bei den positiven Katzenproben im Hinblick auf eine mgliche Kontamination berprft. Alle untersuchten Hirschproben waren negativ, so dass auch hier eine Kontamination ausgeschlossen werden konnte.
Sequenzanalyse
In einer als Hundeprobe gekennzeichneten Probe aus dem Jahr 1973 wurden FPV-typische Sequenzen nachgewiesen. Die ermittelte Sequenz ordnete sich in einem Stammbaum mit FPV- und CPV-Sequenzen eindeutig in den FPV-Cluster ein. Aufgrund der eindeutigen Zuordnung zu den FPV-Isolaten wurde eine berprfung der Spezies des Gewebes vorgenommen. Diese ergab, dass es sich um Gewebe einer Katze und nicht um das eines Hundes handelt. Das feline Panleukopenie-Virus wurde demnach bei einer Katze nachgewiesen. Somit konnte diese Probe nicht, wie zunchst angenommen, zur Aufklrung der Herkunft des CPV beitragen.
Im untersuchten Zeitraum von 1970-1978 wurde in drei Hundeproben das CPV-2 nachgewiesen. Zwei Proben stammen aus dem Jahr 1978 und eine Probe aus dem Jahr 1977. Der Nachweis des caninen Parvovirus in einer Hundeprobe aus 1977 sttzt die Annahme, dass CPV-2 schon vor 1978 in den Hundepopulationen existierte. Durch Sequenzvergleiche auf Nukleotid- und Aminosureebene und anhand der daraus abgeleiteten Stammbume konnten die Sequenzen der drei positiven Hundeproben eindeutig den CPV-2-Isolaten zugeordnet werden. Im Vergleich mit der Referenzsequenz CPV-d war eine 100%ige bereinstimmung vorhanden.
Eine mgliche Kontamination der Proben mit der Positivkontrolle (Zellkulturberstand des Isolats CPV-d) konnte ausgeschlossen werden, da sich in einem Sequenzvergleich auf Nukleotidebene ein Unterschied zwischen den Hundeproben und der Positivkontrolle an der Position 1123 (A(G) zeigte. Auf Aminosureebene fhrt dies an Position 375 zu einer Substitution von Asparagin zu Aspartat bei der Positivkontrolle. Damit unterscheidet sich die Sequenz des Zellkulturberstandes des Isolats CPV-d von den Sequenzen der Hundeproben aber auch von der CPV-d-Sequenz , die in der Genbank-Datenbank hinterlegt ist. Die Ursache fr den Unterschied zwischen der hinterlegten CPV-d-Sequenz und der CPV-d-Sequenz aus der Zellkultur kann in der wiederholten Passagierung des Virus in Zellkultur liegen. Eine Kontamination der Hundeproben untereinander kann aufgrund der negativen Ergebnisse der Hirschproben sowie der Negativkontrollen ausgeschlossen werden.
Die Stammbaumanalyse ergab, dass sich die Sequenzen der Hundeproben eindeutig in die Gruppe der CPV-2 Viren einordnen und besttigen das Bild, dass 1978 beziehungsweise wie in dieser Arbeit gezeigt, bereits 1977 Hunde in Deutschland mit CPV-2 infiziert waren. Bei den untersuchten Sequenzen der Katzenproben ergaben sich im Vergleich zur Referenzsequenz FPV-b einige kodierende und nicht-kodierende Nukleotidunterschiede. Diese vereinzelt bei den Proben vorkommenden Mutationen scheinen zufllige nicht gerichtete oder selektierte Vernderungen im Genom darzustellen.
Bei der Analyse der Stammbume auf Nukleotid- und Aminosureebene lie sich fr die FPV-Sequenzen keine Gruppierung der Proben entsprechend des Zeitpunkts der Isolierung erkennen.
Die Distanztabelle mit den Sequenzen des VP2-Gens der Parvovirus-positiven Katzenproben und den Isolaten CPV-d und FPV-b besttigt die in verschiedenen Studien dargestellte hohe Homologie > 98% zwischen CPV und FPV. Die Abweichungen auf Nukleotidebene lagen zwischen 0,1 und 1,1%, auf Aminosureebene zwischen 0,2 und 2,1%.
Abschlieende Betrachtung
Die hier beschriebenen Untersuchungen zeigen, dass sich sowohl die ermittelte Sequenz einer positiven Hundeprobe aus dem Jahr 1977 als auch die Sequenzen der beiden anderen positiven Hundeproben aus 1978 typische CPV-2-Sequenzen darstellen. Es konnte somit eine Probe vor der Erstbeschreibung 1978 identifiziert werden, die die Theorie sttzt, dass CPV bereits vor 1978 in den Hundepopulationen existierte.
Aufgrund der 100%igen bereinstimmung der Sequenzen untereinander und mit CPV-2 Sequenzen aus der Genbank wird die Vermutung untermauert, dass alle CPV-Isolate auf einen einzigen Anzestor zurckgefhrt werden knnen.
Im Hinblick auf die Anzestorfrage erscheint es sinnvoll, weitere Proben aus den frhen 1970er Jahren zu untersuchen. Durch die Mglichkeit, Virus-DNA aus paraffineingebetteten Geweben amplifizieren und sequenzieren zu knnen, ist die Untersuchung dieser Fragestellung leicht mglich. Der Nachweis des caninen Parvovirus in Hundeproben oder in Proben von Wildtieren aus dieser Zeit knnte dazu beitragen, den Entstehungsmechanismus weiter aufzuklren.
Zusammenfassung
Charakterisierung von caninen und felinen Parvoviren
in archiviertem Organmaterial aus den Jahren 1970 bis 1978
Nicola Rckert
Institut fr Tierhygiene und ffentliches Veterinrwesen
Veterinrmedizinische Fakultt, Universitt Leipzig
Eingereicht im August 2006
89 Seiten, 10 Abbildungen, 15 Tabellen, 100 Literaturstellen
Schlsselworte: canines Parvovirus, CPV-2, VP2, Evolution, paraffineingebettetes Gewebe, PCR, Phylogenie
Das canine Parvovirus (CPV-2) wurde erstmals bei Hunden im Jahr 1978 beschrieben. Dieses Virus verbreitete sich innerhalb weniger Monate weltweit in einer schweren Pandemie. Retrospektiv wird angenommen, dass es sich aus dem Felinen Panleukopenie-Virus (FPV) oder einem nah verwandten Virus entwickelt hat. CPV-2 und FPV sind genetisch sehr hnlich und zeigen eine Identitt auf DNA-Ebene von >98%. Zur Entstehung des CPV-2 gibt es verschiedene Theorien. Neueste Studien, welche die Substitutionsraten von Parvovirusisolaten untersuchten, kamen zu dem Ergebnis, dass CPV-2 bereits 10 Jahre vor der Erstbeschreibung in 1978 in den Hundepopulationen hat zirkulieren mssen.
Ziel dieser Arbeit war es, durch Untersuchung von archivierten paraffineingebetteten Gewebeproben von Hunden und Katzen aus den frhen 1970iger Jahren einen mglichen Anzestor des caninen Parvovirus zu identifizieren und die Hypothese zu berprfen, dass CPV-2 schon vor 1978 in den Hundepopulationen zirkulierte.
Auswahlkriterien fr die Entnahme von Gewebeproben waren pathologische (v.a. akute Gastroenteritis, Myokarditis (Hd.) ) sowie histopathologische Befunde (z.B. Zottenatrophie). Vorberichtliche Erwhnungen wie z.B. Erbrechen und Durchfall, hmorrhagische Enteritis, Lymphopenie, Welpensterben als Bestandsproblem wurden ebenfalls als Hinweise fr eine Infektion mit Parvoviren gewertet. Auf der Grundlage dieser Auswahlkriterien wurden aus den Jahren 1970 bis 1980 aus dem Archiv des Instituts fr Pathologie der Stiftung Tierrztliche Hochschule Hannover 204 Proben ausgewhlt und mit Hilfe der PCR untersucht.
Nachdem mit einem Oligonukleotidpaar (M1RE /M2RE) das Vorkommen von FPV oder CPV in den Proben nachgewiesen wurde, erfolgte eine Auswahl Parvovirus-positiver Proben aus den Jahren 1970 bis 1978 fr die vollstndige Sequenzierung des VP2-Gens.
Es wurden alle Parvovirus-positiven Hundeproben (zwei Proben aus 1978 und eine Probe aus 1977) und 11 Parvovirus-positive Katzenproben untersucht. Um das 1755bp groe VP2-Gen sequenzieren zu knnen, wurden 15 Oligonukleotidpaare erstellt, die berlappende Amplifikate in einer Grenordnung von ca. 150 bis 250bp amplifizieren.
Die ermittelten Sequenzen der Hunde- und Katzenproben wurden jeweils mit einer Referenzsequenz verglichen. Die Sequenzen der Hundeproben wiesen untereinander und zu der Referenzsequenz (CPV-d) eine 100%ige bereinstimmung auf. Dagegen waren bei den Sequenzen der Katzenproben einige kodierende und nicht kodierende Nukleotidaustausche im Vergleich mit der Referenzsequenz (FPV-b) vorhanden.
Unter den untersuchten Sequenzen konnte ein Anzestor des caninen Parvovirus nicht identifiziert werden. Es konnte aber 1977 in einer Hundeprobe CPV-2 nachgewiesen werden. Dieses Ergebnis sttzt die Theorie, dass CPV-2 bereits vor der Erstbeschreibung 1978 in den Hundepopulationen existiert haben muss.
Summary
Characterization of canine and feline parvoviruses in archived tissue samples from 1970 to 1978
Nicola Rckert
Institute of Animal Hygiene and Veterinary Public Health
Faculty of Veterinary Medicine, University of Leipzig
Submitted in August 2006
89 pages, 10 figures, 15 tables, 100 references
Keywords: canine parvovirus, CPV-2, VP2, evolution,
paraffin-embedded tissues, PCR, phylogeny
Canine parvovirus (CPV-2) was first isolated as the cause of disease in dogs in 1978. Within a few months CPV-2 spread epidemically worldwide. In retrospective it is clear that CPV-2 emerged from feline panleukopenia virus (FPV) or a closley related virus.
CPV-2 and FPV are >98% identical in their DNA sequences and very similar antigenically. There are many theories about the evolution of CPV-2 and recent studies determined substitution rates of several parvoviruses. The results indicate, that CPV-2 circulated in the canine population up to 10 years before it was first recognized.
The goal of the study was to identify a possible ancestor of the canine parvovirus and to determine if CPV-2 was prevalent in dog population prior to 1978.
Proofing this hypothesis archived paraffin-embedded tissue samples from dogs and cats from 1970 to 1978 were investigated.
Tissue samples had been selected on the basis of pathological (especially gastroenteritis, myocarditis (puppies)) and histopathological (e.g. necrosis of the crypt cells of the intestinal epithelium) results. Reports of vomiting, diarrhoea, haemorrhagic enteritis, lymphopenia, death of puppies were also regarded as possible symptoms of an infection with parvoviruses.
On the basis of these conditions 204 samples from 1970-1980 were selected from the Institute of Pathology of the University of Veterinary Medicine, Hannover and investigated by polymerase chain reaction. In a first assay, samples were tested for the presence of CPV-2 or FPV with primer pair M1RE and M2RE. Then the VP2-gene with a total length of 1755 bp of all positive samples from 1970-1978 from dogs (two from 1978, one from 1977) and 11 samples from cats were amplified and sequenced.
Fifteen Primer pairs were designed to amplify overlapping fragments of 150 to 250 nucleotides in length. The sequences were compared with reference sequences retrieved from the Genbank. The dog samples were 100% identical to the reference sequence CPV-d. The cat samples showed several coding and non-coding single nucleotide substitutions in comparison with reference sequence FPV-b.
In conclusion of this study we were able to identify a CPV-2 sequence in one dog sample from 1977, supporting the hypothesis that CPV-2 was already present prior 1978 in the German dog population.
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Anhang
Chemikalien und Reagenzien
TBE Puffer (1 Liter)
Tris 10,8g
Borat 5,5g
EDTA 0,83g
destilliertes Wasser
2%iges Agarosegel
peq GOLD Universal Agarose 2g
TBE Puffer 100ml
TE Puffer
10mM Tris-CL
1mM EDTA
TAE Puffer (1 Liter)
Tris 249g
Essigsure 57,1 ml
EDTA 50mM
destilliertes Wasser
LB-Z-Nhrbden
LB-Platte: Difco( Luria Agar Base, Miller
Ampicillin 100mg/l
X-Gal 2%
IPTG 0,1M
Tabellen
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 11: Ausgewhlte Proben (Hunde und Katzen) von 1980 1970
JahrHundSektions-Nr.GewebeKatzeSektions-Nr.Gewebe1980552S 4209/80Darm549S 4159/80Darm556S 4290/80Darm574S 4531/80Darm576S 4801/80Herz583S 5378/80Darm580S 4952/80Darm593S 5608/80Darm584S 5470/80Darm604S 5981/80Darm585S 5514/80Herz605S 6039/80Darm600S 5791/80Darm615S 6221/80Darm610S 6161/80Darm616S 6227/80Darm621S 6312/80Darm624S 6339/80Darm656S 6538/80Darm631S 6362/80Darm1979488S 2060/79Darm497S 2442/79Darm490S 2110/79Darm503S 3056/79Darm491S 2126/79Darm505S 3112/79Darm494S 2335/79Darm507S 3207/79Darm498S 2520/79Darm510S 3414/79Darm513S 3530/79Darm515S 3544/79Darm518S 3580/79Darm516S 3553/79Darm531S 3726/79Darm519S 3591/79Darm533S 3769/79Darm528S 3700/79Darm541S 4063/79Darm535S 3795/79Darm1978431S 6772/78Darm425S 6599/78Darm437S 6931/78Darm428S 6718/78Darm443S 195/78Darm429S 6728/78Darm445S 300/78Darm430S 6757/78Darm447S 326/78Darm436S 6918/78Darm455S 772/78Darm444S 259/78Darm458S 880/78Darm452S 663/78DarmHundSektions-Nr.GewebeKatzeSektions-Nr.Gewebe472S 1401/78Darm453S 708/78Darm478S 1638/78Herz462S 1098/78Darm464S 1111/78Darm476S 1527/78Darm1977389S 5034/77Darm386S 4699/77Darm398S 5533/77Darm390S 5043/77Darm403S 5731/77Darm391S 5134/77Darm404S 5732/77Darm394S 5342/77Darm417S 6222/77Darm399S 5534/77Darm420S 6357/77Darm400S 5616/77Darm421S 6361/77Darm408S 5898/77Darm422S 6415/77Darm410S 5969/77Darm412S 5984/77Darm416S 6171/77Darm1976366S 2771/76Darm363S 2588/76Darm367S 2775/76Darm365S 2744/76Darm369S 2833/76Darm371S 3397/76Darm372S 3631/76Herz374S 3771/76Darm379S 4113/76Darm375S 3934/76Darm381S 4295/76Darm376S 3967/76Darm378S 3985/76Darm383S 4443/76Darm384S 4458/76Darm385S 4487/76Darm1975345S 1191/75Herz337S 674/75Darm348S 1617/75Herz/Darm338S 704/75Darm354S 2152/75Herz340S 859/75Darm362S 2547/75Herz341S 924/75Darm342S 974/75Darm347S 1450/75Darm351S 2115/75Darm352S 2135/75Darm359S 2467/75Darm361S 2503/75DarmJahrHundSektions-Nr.GewebeKatzeSektions-Nr.Gewebe1974305S 5706/74Darm/Herz307S 5823/74Darm316S 6457/74Darm308S 5830/74Darm322S 93/74Darm309S 5945/74Darm323S 105/74Herz313S 6296/74Darm331S 538/74Darm318S 6472/74Darm332S 539/74Darm324S 234/74Darm335S 650/74Darm326S 408/74Darm328S 459/74Darm329S 460/74Darm334S 587/74Darm1973256S 3883/73Darm258S 4005/73Darm257S 3888/73Darm259S 4013/73Darm264S 4165/73Darm260S 4025/73Darm265S 4265/73Darm267S 4362/73Darm268S 4428/73Herz273S 4607/73Darm269S 4562/73Herz277S 4735/73Darm272S 4587/73Darm278S 4887/73Darm275S 4630/73Darm279S 4888/73Darm276S 4634/73Darm281S 5102/73Darm271S 4585/73Darm274S 4614/73Herz286S 5313/73Darm287S 5318/73Darm290S 5359/73Darm292S 5373/73Darm293S 5374/73Darm301S 5523/73Darm1972222S 2052/72Darm221S 2049Darm224S 2070/72Darm227S 2187Darm229S 2336/72Darm232S 2664Darm238S 3001/72Herz240S 3152Darm241S 3178/72Darm243S 3528DarmHundSektions-Nr.GewebeKatzeSektions-Nr.Gewebe242S 3187/72Darm244S 3524Darm245S 3529/72Darm246S 3538Darm252S 3749/72Herz249S 3669Darm250S 3679Darm251S 3747Darm1971191S 220/71Herz193S 569/71Darm192S 444/71Darm194S 570/71Darm198S 614/71Herz195S 571/71Darm207S 899/71Darm196S 588/71Darm208S 986/71Darm210S 1099/71Darm213S 1825/71Darm214S 1841/71Darm217S 1936/71Darm215S 1853/71Darm1970173S 419/70Herz171S 246Darm176S 661/70Darm172S 297Darm177S 723/70Darm174S 469Darm180S 1295/70Herz179S 881Darm181S 1339/70Herz183S 1384Darm182S 1367/70Darm/Herz184S 1521Darm186S 1849/70Herz187S 1850/70Herz188S 1851/70Herz
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 12: Ausgewhlte Proben anderer Tierarten
JahrTierartFallSektions-Nr.Gewebe1967Nerz108S 1014/67Herz/DarmNerz109S1015/67Herz/Darm1972Wolf225S 2098/72Darm1973Nerz294S 5384/73Darm1974Waschbr320S 42/74DarmWaschbr321S 43/74Darm
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 13: Parvovirus-positive Proben bei Hunden (1970-1980)
FallSektionsNr.Diagnose/ BefundAlterGewebeVorbericht1973281S 5102/73Hmorrhagisch-katarrhalische Enteritis8 Wo.DarmSchreien, blutiger Durchfall, Erbrechen1977420S 6357/77Enteritis cat., hgr. Schwellung der Mesenterial Lnn.10 Wo.Darm?1978455S 772/78Hgr. fibrinse Enteritis7 Wo.DarmDurchfall, mehrere Tiere tot464S 1111/78Gastroenteritis cat. acuta11 Wo.DarmErbrechen, Durchfall, gestorben1979490S 2110/79hgr. ulzerierende Enteritis10 Wo.Darmverendet498S 2520/79Enteritis cat. akutajuvenilDarmErbrechen, blutiger Durchfall, Bestand krank513S 3530/79Enteritis, Verlust der Darmschleimhaut16 MonDarmErbrechen, Durchfall518S 3580/79Virusinfektion unbekannter Genese?DarmErbrechen, blutiger Durchfall513S 3726/79Gastroenteritis, ulzerierte Darmschleimhaut8 Wo.Darmgestorben1980552S 4209/80Enteritis (Parvoviren)13 Wo.DarmHmorrhagische Enteritis556S 4290/80Virale hmorrhagische Enteritis3 Mon.DarmErbrechen, blutiger Durchfall580S 4952/80Parvo-Virus-Enteritis4 Mon.DarmErbrechen, Durchfall, Panleukopenie585S 5514/80Parvovirusenteritis10 Wo.HerzErbrechen, Durchfall600S 5791/80Parvovirusinfektion9 Wo.DarmErbrechen, Druchfall610S 6161/80Parvovirusinfektion12 Wo.DarmErbrechen, Durchfall621S 6312/80fibrinse Auflagerung Darm, wssrig-blutiger Inhalt8 Mon.DarmErbrechen, blutiger Druchfall, Verdacht Parvovirose656S 6538/80Parvovirusinfektion3 Mon.DarmErbrechen, Durchfall, aus Tierheim
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 14: Parvovirus-positive Proben bei Katzen (1970-1980)
FallSektionsNr..Diagnose/ BefundAlterGewebeVorbericht1970172S 297/70Enteritis, Lymphadenitis8 Mon.Darmgestorben174S 469/70Panleukopenie9 Mon.Darmganze Wrfe gestorben oder tot geboren183S 1384/70Verdacht Laryngoenteritis, Enteritis cat., Tonsillitis?Darmhufig Todesflle im Katzenbestand184S 1521/70hgr. cat. Enteritis4 Mon.DarmVerdacht Panleukopenie1971194S 570/71Verdacht Katzenseuche, chronische Enteritis?Darmpltzlich gestorben195S 571/71Verdacht Laryngoenteritis, Enteritis?Darmpltzlich gestorben196S 588/71Verdacht Panleukopenie?DarmTransport von 15 Katzen, davon 4 tot214S 1841/71blutige Enteritis?DarmNiesen215S 1853/71PanleukopenieWelpeDarm?1972221S 2049/72Panleukopenie?Darm?227S 2187/72Panleukopenie?Darm1 Wurf davon 3 tot232S 2664/72fibrinse Enteritis4 Mon.DarmVerdacht Katzenseuche240S 3152/72Panleukopenie, diphteroide Enteritis5 Mon.DarmErbrechen, Durchfall, Fieber243S 3528/72hgr. akute kat. Gastroenteritis?DarmFieber, Durchfall, gestorben244S 3524/72hgr. akute kat. Gastroenteritis?DarmFieber, Durchfall, gestorben246S 3538/72Katzenseuche?DarmVerdacht Vergiftung249S 3669/72hgr. akute kat. Gastroenteritis?DarmVerdacht PanleukopenieFallSektions-Nr.Diagnose/ BefundAlterGewebeVorbericht250S 3679/72Katzenseuche5 Mon.Darm?1973259S 4013/73Verdacht Panleukopenie9 Mon.DarmErbrechen, gestorben260S 4025/73Panleukopenie?DarmErbrechen, Durchfall, Fieber267S 4362/73Panleukopenie?DarmApathie, Anorexie273S 4607/73Infektise Laryngoenteritis2 JahreDarmApathie, Inappetenz277S 4735/73Infektise Laryngoenteritis8 Wo.DarmStammt aus Tierheim, Inappetenz279S 4888/73Panleukopenie10 Wo.Darmgestorben1974307S 5823/74Panleukopenie?Darm?308S 5830/74Panleukopenie1 JahrDarm3 Katzen tot, Erbrechen, Durchfall318S 647/274Panleukopenie17 Mon.DarmErbrechen, Untertemperatur324S 234/74PanleukopenieadultDarm?328S 459/74Gastroenteritis9 Mon.DarmErbrechen, Durchfall1975337S 674/75Panleukopenie?Darm?341S 924/75Panleukopenie6 Mon.DarmErbrechen, Durchfall342S 974/75PanleukopeniejungDarm?347S 1450/75Panleukopenie2 JahreDarm?359S 2467/75Panleukopenie4 Mon.DarmGastroenteritis, Stomatitis361S 2503/75Panleukopenie?Darm3 von 7 Katzen tot, Erbrechen, DurchfallFallSektions-Nr.Diagnose/ BefundAlterGewebeVorbericht1976363S 2588/76Panleukopenie3 Mon.DarmBrechdruchfall375S 3934/76Panleukopenie, Enteritis cat. fibrinosa2 Mon.DarmRhinotracheitis383S 4443/76Panleukopenie1 JahrDarmErbrechen1977386S 4699/77Laryngoenteritis6 Mon.DarmOhne Symptome gestorben390S 5043/77/5 JahreDarmVerdacht Panleukopenie391S 5134/77Verdacht Panleukopenie1 JahrDarmErbrechen, Durchfall408S 5898/77Gastoenteritis5 Wo.DarmBrechdurchfall, Bestandserkrankung410S 5969/77hgr. Zottenatrophie1 JahrDarmpltzlich tot412S 5984/77Enteritis1 JahrDarm?416S 6171/77Panleukopenie1 JahrDarmInappentenz, gestorben1978425S 6599/78Panleukopenie10 Mon.Darm4 Katzen tot in einer Woche, Apathie428S 6718/78Verdacht Panleukopenie3 Mon.DarmErbrechen, Durchfall430S 6757/78Panleukopenie8 Mon.DarmVerdacht Panleukopenie436S 6918/78PanleukopenieAdultDarmmehrere Katzen nach Erbrechen tot452S 663/78Verdacht Panleukopenie8 Mon.DarmErbrechen, Durchfall462S 1098/78Panleukopenie14 Wo.DarmErbrechen, Wurfgeschwister tot476S 1527/78Verdacht Panleukopenie3,5 Mon.Darmaus Tierheim, Erbrechen, DurchfallFallSektions-Nr.Diagnose/ BefundAlterGewebeVorbericht1979497S 2442/79cat. hm. Enteritis10 Mon.DarmErbrechen, Durchfall503S 3056/79Enteritis cat. akuta, Verdacht Vergiftung8 Wo.Darm3 Katzen pltzlich tot507S 3207/79Enteritis, Verdacht PanleukopeniejungDarm?510S 3414/79Panleukopenie11 Wo.DarmErbrechen, Inappetenz515S 3544/79hm. Enteritis2 Mon.DarmErbrechen, Fieber, Apathie516S 3553/79PanleukopeniejungDarmErbrechen, Durchfall, pltzlich tot519S 3591/79Panleukopenie2 Mon.Darmpltzlich tot1980583S 5378/80Verdacht Panleukopenie10 Wo.DarmAtaxie593S 5608/80Verdacht Panleukopenie3 Mon.DarmErbrechen, Inappetenz605S 6039/80Panleukopenie5 Mon.DarmErbrechen615S 6221/80Panleukopenie7 Mon. Darm?616S 6227/80Panleukopenie2 Mon.Darmgestorben
Tabelle SEQ Tabelle \* ARABIC 15: Parvovirus-positive Proben anderer Tierarten: Waschbr
FallSektions-Nr.Diagnose/ BefundAlterGewebeVorbericht1974321S 42/74fibrinse Enteritis?DarmWildfang; seit 6 Wochen im Gehege; pltzlicher TodVerwendete Codes
genetischer Code
1. Position
2. Position3. Position
(5 Ende)TCAG(3 Ende)PheSerTyrCysTTPheSerTyrCysCLeuSerSTOPSTOPALeuSerSTOPTrpGLeuProHisArgTCLeuProHisArgCLeuProGlnArgALeuProGlnArgGIleThrAsnSerTAIleThrAsnSerCIleThrLysArgAMetThrLysArgGValAlaAspGlyTGValAlaAspGlyCValAlaGluGlyAValAlaGluGlyG
universeller genetischer Code
AAdeninCCytosinGGuaninTThymin
Aminosuren und ihre Symbole Codons
AAlaAlaninGCAGCCGCGGCTCCysCysteinTGCTGTDAspAspartatGACGATEGluGlutamatGAAGAGFPhePhenylalaninTTCTTTGGlyGlycinGGAGGCGGGGGTHHisHistidinCACCATIIleIsoleucinATAATCATTKLysLysinAAAAAGLLeuLeucinTTATTGCTACTCCTGCTTMMetMethioninATGNAsnAsparaginAACAATPProProlinCCACCCCCGCCTQGlnGlutaminCAACAGRArgArgininAGAAGGCGACGCCGGCGTSSerSerinAGCAGTTCATCCTCGTCTTThrThreoninACAACCACGACTVValValinGTAGTCGTGGTTWTrpTryptophanTGGYTyrTyrosinTACTAT
Vergleich der Parvovirussequenzen aus den Katzengeweben mit der Referenzsequenz FPV-b
Nukleotidsequenz des VP2-Gens
1 A T G A G T G A T G G A G C A G T T C A FPV-b CU4 21 A C C A G A C G G T G G T C A A C C T G FPV-b CU4
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
41 C T G T C A G A A A T G A A A G A G C T FPV-b CU4 61 A C A G G A T C T G G G A A C G G G T C FPV-b CU4
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
81 T G G A G G C G G G G G T G G T G G T G FPV-b CU4 101 G T T C T G G G G G T G T G G G G A T T FPV-b CU4
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - C - 386 Ktz. 77 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
121 T C T A C G G G T A C T T T C A A T A A FPV-b CU4 141 T C A G A C G G A A T T T A A A T T T T FPV-b CU4
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
121 - - - - - - - - - - - - - - - T - - - - - 308 Ktz. 74 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
161 T G G A A A A C G G G T G G G T G G A A FPV-b CU4 181 A T C A C A G C A A A C T C A A G C A G FPV-b CU4
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 181 - - T - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
161 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
201 A C T T G T A C A T T T A A A T A T G C FPV-b CU4 221 C A G A A A G T G A A A A T T A T A A A FPV-b CU4
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
241 A G A G T A G T T G T A A A T A A T A T FPV-b CU4 261 G G A T A A A A C T G C A G T T A A A G FPV-b CU4
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
241 - - - - - G - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 261 - - - - - - - - - - T - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 261 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 261 - - - - - - - - - - - - - A - - - - - - 430 Ktz. 78
281 G A A A C A T G G C T T T A G A T G A T FPV-b CU4 301 A C T C A T G T A C A A A T T G T A A C FPV-b CU4
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 32 Ktz. 72 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
321 A C C T T G G T C A T T G G T T G A T G FPV-b CU4 341 C A A A T G C T T G G G G A G T T T G G FPV-b CU4
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
361 T T T A A T C C A G G A G A T T G G C A FPV-b CU4 381 A C T A A T T G T T A A T A C T A T G A FPV-b CU4
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
401 G T G A G T T G C A T T T A G T T A G T FPV-b CU4 421 T T T G A A C A A G A A A T T T T T A A FPV-b CU4
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
401 - - - - - - - - - - - - - - A - - - - - 386 Ktz. 77 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
441 T G T T G T T T T A A A G A C T G T T T FPV-b CU4 461 C A G A A T C T G C T A C T C A G C C A FPV-b CU4
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
441 - - - - - - - C - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
481 C C A A C T A A A G T T T A T A A T A A FPV-b CU4 501 T G A T T T A A C T G C A T C A T T G A FPV-b CU4
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 501 C - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
521 T G G T T G C A T T A G A T A G T A A T FPV-b CU4 541 A A T A C T A T G C C A T T T A C T C C FPV-b CU4
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
561 A G C A G C T A T G A G A T C T G A G A FPV-b CU4 581 C A T T G G G T T T T T A T C C A T G G FPV-b CU4
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 581 - - - - A - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 581 - - - - A - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
601 A A A C C A A C C A T A C C A A C T C C FPV-b CU4 621 A T G G A G A T A T T A T T T T C A A T FPV-b CU4
601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
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601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
641 G G G A T A G A A C A T T A A T A C C A FPV-b CU4 661 T C T C A T A C T G G A A C T A G T G G FPV-b CU4
641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
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641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
641 - - - - - - - G - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
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641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
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641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
681 C A C A C C A A C A A A T A T A T A T C FPV-b CU4 701 A T G G T A C A G A T C C A G A T G A T FPV-b CU4
681 - - - - - - - - - - - - - G - - - - - - 174 Ktz. 70 701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
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681 - - - - - - - - - - - - - G - - - - - - 277 Ktz. 73 701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
681 - - - - - - - - - - - - - G - - - - - - 281 Ktz. 73 701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
681 - - - - - - - - - - - - - G - - - - - - 308 Ktz. 74 701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
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681 - - - - - - - - - - - - - G - - - - - - 363 Ktz. 76 701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
681 - - - - - - - - - - - - - G - - - - - - 386 Ktz. 77 701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
681 - - - - - - - - - - - - - G - - - - - - 425 Ktz. 78 701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
681 - - - - - - - - - - - - - G - - - - - - 430 Ktz. 78 701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
721 G T T C A A T T T T A T A C T A T T G A FPV-b CU4 741 A A A T T C T G T G C C A G T A C A C T FPV-b CU4
721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 741 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 741 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 741 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 741 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 741 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 741 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
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761 T A C T A A G A A C A G G T G A T G A A FPV-b CU4 781 T T T G C T A C A G G A A C A T T T T T FPV-b CU4
761 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 781 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
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761 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 781 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
761 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 781 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
761 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 781 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
761 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 781 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
761 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 781 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
761 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 781 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
761 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 781 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
761 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 781 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
801 T T T T G A T T G C A A A C C A T G T A FPV-b CU4 821 G A C T A A C A C A T A C A T G G C A A FPV-b CU4
801 - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
801 - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
801 - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
801 C - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
801 - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
801 - - - C - - - - - T - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
801 - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
801 - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
801 - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
801 - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
801 - - - - - - - - - T - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 821 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
841 A C A A A T A G A G C A T T G G G C T T FPV-b CU4 861 A C C A C C A T T T T T A A A T T C T T FPV-b CU4
841 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 861 - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
841 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 861 - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
841 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 861 - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
841 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 861 - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
841 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 861 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
841 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 861 - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
841 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 861 - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
841 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 861 - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
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841 A C A A A T A G A G C A T T A G G C T T 425 Ktz. 78 861 - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
841 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 861 - - - - - - - - - - C - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
881 T G C C T C A A T C T G A A G G A G C T FPV-b CU4 901 A C T A A C T T T G G T G A T A T A G G FPV-b CU4
881 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 901 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
881 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 901 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
881 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 901 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
881 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 901 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
881 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 901 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
881 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 901 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
881 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 901 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
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881 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 901 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
881 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 901 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
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921 A G T T C A A C A A G A T A A A A G A C FPV-b CU4 941 G T G G T G T A A C T C A A A T G G G A FPV-b CU4
921 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 941 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
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921 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 941 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
921 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 941 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
921 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 941 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
921 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 941 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
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921 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 941 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
921 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 941 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
921 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 941 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
961 A A T A C A G A C T A T A T T A C T G A FPV-b CU4 981 A G C T A C T A T T A T G A G A C C A G FPV-b CU4
961 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 981 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
961 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 981 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
961 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 981 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
961 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 981 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
961 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 981 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
961 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 981 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
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1001 C T G A G G T T G G T T A T A G T G C A FPV-b CU4 1021 C C A T A T T A T T C T T T T G A A G C FPV-b CU4
1001 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1021 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1001 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1021 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1001 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1021 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1001 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1021 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1001 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1021 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1001 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1021 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1001 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1021 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
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1001 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1021 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
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1001 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1021 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1041 G T C T A C A C A A G G G C C A T T T A FPV-b CU4 1061 A A A C A C C T A T T G C A G C A G G A FPV-b CU4
1041 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1041 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1041 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1041 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1041 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
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1041 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1041 A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1041 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1041 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1041 A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1061 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1081 C G G G G G G G A G C G C A A A C A G A FPV-b CU4 1101 T G A A A A T C A A G C A G C A G A T G FPV-b CU4
1081 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1081 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1081 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1081 - - - - - - - - - - - A - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1081 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1081 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
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1081 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1121 G T G A T C C A A G A T A T G C A T T T FPV-b CU4 1141 G G T A G A C A A C A T G G T C A A A A FPV-b CU4
1121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
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1121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1161 A A C T A C T A C A A C A G G A G A A A FPV-b CU4 1181 C A C C T G A G A G A T T T A C A T A T FPV-b CU4
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1201 A T A G C A C A T C A A G A T A C A G G FPV-b CU4 1221 A A G A T A T C C A G A A G G A G A T T FPV-b CU4
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1221 - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1221 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1241 G G A T T C A A A A T A T T A A C T T T FPV-b CU4 1261 A A C C T T C C T G T A A C A A A T G A FPV-b CU4
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1281 T A A T G T A T T G C T A C C A A C A G FPV-b CU4 1301 A T C C A A T T G G A G G T A A A A C A FPV-b CU4
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1281 - - - - - - - - - A - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1321 G G A A T T A A C T A T A C T A A T A T FPV-b CU4 1341 A T T T A A T A C T T A T G G T C C T T FPV-b CU4
1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
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1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1361 T A A C T G C A T T A A A T A A T G T A FPV-b CU4 1381 C C A C C A G T T T A T C C A A A T G G FPV-b CU4
1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
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1361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1401 T C A A A T T T G G G A T A A A G A A T FPV-b CU4 1421 T T G A T A C T G A C T T A A A A C C A FPV-b CU4
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1441 A G A C T T C A T G T A A A T G C A C C FPV-b CU4 1461 A T T T G T T T G T C A A A A T A A T T FPV-b CU4
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1461 - - - - - - - - - C - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1481 G T C C T G G T C A A T T A T T T G T A FPV-b CU4 1501 A A A G T T G C G C C T A A T T T A A C FPV-b CU4
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1521 G A A T G A A T A T G A T C C T G A T G FPV-b CU4 1541 C A T C T G C T A A T A T G T C A A G A FPV-b CU4
1521 A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1521 A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1521 A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1521 A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1521 A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1521 A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1521 A - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1561 A T T G T A A C T T A T T C A G A T T T FPV-b CU4 1581 T T G G T G G A A A G G T A A A T T A G FPV-b CU4
1561 - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1561 - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1561 - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1561 - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1561 - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1561 - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1561 - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1561 - - - - - - - - - - - C - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1581 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1601 T A T T T A A A G C T A A A C T A A G A FPV-b CU4 1621 G C A T C T C A T A C T T G G A A T C C FPV-b CU4
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1601 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1621 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1641 A A T T C A A C A A A T G A G T A T T A FPV-b CU4 1661 A T G T A G A T A A C C A A T T T A A C FPV-b CU4
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1641 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1661 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1681 T A T G T A C C A A A T A A T A T T G G FPV-b CU4 1701 A G C T A T G A A A A T T G T A T A T G FPV-b CU4
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1701 - - - - - - - - - G - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1681 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1701 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
1721 A A A A A T C T C A A C T A G C A C C T FPV-b CU4 1741 A G A A A A T T A T A T T A A FPV-b CU4
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1721 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 1741 - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
Aminosuresequenz des VP2-Gens
1 M S D G A V Q P D G G Q P A V R N E R A FPV-b CU4 21 T G S G N G S G G G G G G G S G G V G I FPV-bCU4
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 21 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
41 S T G T F N N Q T E F K F L E N G W V E FPV-b CU4 61 I T A N S S R L V H L N M P E S E N Y K FPV-b CU4
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
41 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 61 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
81 R V V V N N M D K T A V K G N M A L D D FPV-b CU4 101 T H V Q I V T P W S L V D A N A W G V W FPV-b CU4
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
81 - - - - - - - - - - S - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
81 - - - - - - - - - - T - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
81 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
81 - - - - - - - - - - - I - - - - - - - - 430 Ktz. 78 101 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
121 F N P G D W Q L I V N T M S E L H L V S FPV-b CU4 141 F E Q E I F N V V L K T V S E S A T Q P FPV-b CU4
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - I - 386 Ktz. 77 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
121 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 141 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
161 P T K V Y N N D L T A S L M V A L D S N FPV-b CU4 181 N T M P F T P A A M R S E T L G F Y P W FPV-b CU4
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
161 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 181 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
201 K P T I P T P W R Y Y F Q W D R T L I P FPV-b CU4 221 S H T G T S G T P T N I Y H G T D P D D FPV-b CU4
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - - 174 Ktz. 70
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 195 Ktz. 71
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 232 Ktz. 72
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 277 Ktz. 73
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 281 Ktz. 73
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 308 Ktz. 74
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 361 Ktz. 75
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 363 Ktz. 76
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 386 Ktz. 77
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 425 Ktz. 78
201 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 221 - - - - - - - - - - - V - - - - - - - 430 Ktz. 78
241 V Q F Y T I E N S V P V H L L R T G D E FPV-b CU4 261 F A T G T F F F D C K P C R L T H T W Q FPV-b CU4
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
241 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 261 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
281 T N R A L G L P P F L N S L P Q S E G A FPV-b CU4 301 T N F G D I G V Q Q D K R R G V T Q M G FPV-b CU4
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
281 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 301 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
321 N T D Y I T E A T I M R P A E V G Y S A FPV-b CU4 341 P Y Y S F E A S T Q G P F K T P I A A G FPV-b CU4
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
321 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 341 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
361 R G G A Q T D E N Q A A D G D P R Y A F FPV-b CU4 381 G R Q H G Q K T T T T G E T P E R F T Y FPV-b CU4
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
361 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 381 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
401 I A H Q D T G R Y P E G D W I Q N I N F FPV-b CU4 421 N L P V T N D N V L L P T D P I G G K T FPV-b CU4
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
401 - - - - - - - - - - A - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
401 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 421 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
441 G I N Y T N I F N T Y G P L T A L N N V FPV-b CU4 461 P P V Y P N G Q I W D K E F D T D L K P FPV-b CU4
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
441 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 461 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
481 R L H V N A P F V C Q N N C P G Q L F V FPV-b CU4 501 K V A P N L T N E Y D P D A S A N M S R FPV-b CU4
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
481 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 501 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
521 I V T Y S D F W W K G K L V F K A K L R FPV-b CU4 541 A S H T W N P I Q Q M S I N V D N Q F N FPV-b CU4
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78
521 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 541 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78
561 Y V P N N I G A M K I V Y E K S Q L A P FPV-b CU4 581 R K L Y . FPV-b CU4
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 174 Ktz. 70 581 - - - - . 174 Ktz. 70
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 195 Ktz. 71 581 - - - - . 195 Ktz. 71
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 232 Ktz. 72 581 - - - - . 232 Ktz. 72
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 277 Ktz. 73 581 - - - - . 277 Ktz. 73
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 281 Ktz. 73 581 - - - - . 281 Ktz. 73
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 308 Ktz. 74 581 - - - - . 308 Ktz. 74
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 361 Ktz. 75 581 - - - - . 361 Ktz. 75
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 363 Ktz. 76 581 - - - - . 363 Ktz. 76
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 386 Ktz. 77 581 - - - - . 386 Ktz. 77
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 425 Ktz. 78 581 - - - - . 425 Ktz. 78
561 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 430 Ktz. 78 581 - - - - . 430 Ktz. 78
Danksagung
Herrn Prof. Dr. Uwe Truyen danke ich fr die Bereitstellung des Themas, die wissenschaftliche Betreuung und die stets gewhrte Hilfe und Untersttzung.
Herrn Dr. Peter Wohlsein danke ich fr die Bereitstellung der Gewebeproben aus dem umfassenden Archiv des Institus fr Pathologie in Hannover sowie fr seine Hilfe und Beratung bei der Probennahme.
Frau Dr. Sonja Wilhelm danke ich besonders fr ihre stets gewhrte freundliche Hilfe. Beim praktischen Arbeiten im Labor sowie bei allen anfallenden Fragen im Bereich der Molekularbiologie war sie mir eine sehr groe Hilfe. Ich danke ihr sehr fr ihre Untersttzung in allen Bereichen whrend meiner Zeit am Institut und ihre konstruktive Kritik bei der Anfertigung der Dissertationsmanuskriptes.
Herrn Dr. Uwe Rsler danke ich fr seine freundliche Hilfe bei Computerproblemen und anderen diversen Problemen, die im Rahmen meiner Doktorarbeit aufgetreten sind.
Frau Nadja Leinecker und Frau Evelin Brumme danke ich herzlich fr ihre Hilfsbereitschaft im Labor.
Bedanken mchte ich mich auch bei den Doktoranden des Insituts fr Tierhygiene und ffentliches Veterinrwesen, insbesondere meiner besten Freundin Vivian Hennig fr ihre Untersttzung. Gemeinsam haben wir alle Hhen und Tiefen im Studium und im Institut gemeistert.
Besonders mchte ich mich bei meinem Freund Lars Schneider fr seine Geduld, seine Hilfe und seine aufmunternden Worte bedanken, die mich immer wieder motiviert und mir viel bedeutet haben.
Meinen Eltern gilt mein ganz besonderer Dank. Ich danke ihnen fr ihre Untersttzung sowohl whrend meiner Studienzeit als auch whrend meiner Zeit als Doktorandin. Ihre konstruktive Kritik bei allen Fragen rund um die Doktorarbeit waren mir eine groe Hilfe.
PAGE
Inhaltsverzeichnis
Abkrzungsverzeichnis
Tabellenverzeichnis
Abbildungsverzeichnis
Einleitung
PAGE 55
STYLEREF "berschrift 1" Literaturbersicht
STYLEREF "berschrift 1" Material und Methoden
STYLEREF "berschrift 1" Material und Methoden
STYLEREF "berschrift 1" Ergebnisse
STYLEREF "berschrift 1" Ergebnisse
STYLEREF "berschrift 1" Ergebnisse
Diskussion
STYLEREF "berschrift 1" Zusammenfassung
STYLEREF "berschrift 1" Summary
Literaturverzeichnis
Anhang
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Anhang
Anhang
Anhang
Danksagung
f: vorwrts gerichtete Amplifikationsrichtung (forward)
r: rckwrts gerichtete Amplifikationsrichtung (reverse)
( (: nicht zu FPV-b komplementr __: Restriktionsenzymschnittstelle
R: Nukleotid A oder G bp: Basenpaare
MG: Molekulargewichts-standard (50 bp)
1,2,3 : Proben
(Doppelansatz)
+ : Positivkontrolle (10-9)
- : Negativkontrolle
250 bp (
1 2 3
+ -
MG
MG: Molekulargewichtsstandard
(50bp)
+: Positivkontrolle
(Zellkulturberstand CPV 265 10-3)
- : Negativkontrolle
Oligonukleotidpaare (jeweils f u. r):
A, A0, A1, A2, A3, A4, B, B1
+ - + - + - + -
A2 A3 A4 B B1
MG
MG
+ - + - + - + -
A A0 A1 A2
MG: Molekulargewichtsstandard
(50bp)
+: Positivkontrolle
(Zellkulturberstand CPV 265 10-3)
- : Negativkontrolle
Oligonukleotidpaare (jeweils f und r):
B1, B2, B3, B4, B5,C,C1
M: M1RE+M2RE
+ - + - + -
B5 C C1 M
MG
MG
+ - + - + - + -
B1 B2 B3 B4
1) 25 mM MgCl2
2) zusammen mit MgCl2 im PCR Puffer: 3,75mM
3) fr jedes dNTP
250 bp (
-
MG
10-4 10-8 10-12
MG: Molekulargewichtsstandard
(50bp)
- : Negativkontrolle
DNA
Aminosure
* Modifiziert nach ADDIN REFMGR.CITE Tattersall20063The evolution of parvovirus taxonomyBook Chapter3The evolution of parvovirus taxonomyTattersall,Peter2006Not in File514ParvovirusesKerr,Jonathan R.Cotmore,Susan F.Bloom,Marshall E.Linden,MichaelParrish,Colin R.1LondonHodder Arnold3(TATTERSALL 2006)
1 exemplarisch jeweils nur ein Vertreter aufgefhrt
5x-Achse
3x-Achse 2x-Achse 3x-Achse
Three-fold-spike Dimple Three-fold-spike
Canyon
3x-Achse
5x-Achse
ABa, EFf : palindromische Sequenzen
1)hairpin-Struktur am 3-Ende dient als Primer 2)Amplifikation mittels zellulrer Polymerase 3)Ligation 4)Auftrennen der zirkulren DNA durch Nickase-Aktivitt des NS1 5) bis 7)Bildung eines doppelstrngiges DNA- Molekl 8)Spaltung, Ligation und Verlngerung des DNA-Molekls 9)Bildung von zwei Intermedirprodukten 10)Verpackung des Minus-Strangs in das Kapsid 11)Virion mit noch angehefteten NS1
Lys80Arg
Lys93Asn
Asp323Asn
Ser564Asn
Gly568Ala
Hund und Katze
CPV-2b (1984-heute)
Asp426Asn
Ile555Val
CPV-2a (1978 bis heute)
Leu87Met
Ala300Gly
Asp305Tyr
Bindung an felinen TfR
FPV (< 1900 bis heute)
MEV (1940 bis heute)
Anpassung an caninen TfR
CPV-2 (1978-1981)
heute ausgestorben
Hund
Katze
(Fuchs,Nerz)?
Val103Ile
Blau/Trkis: Unterschiede zwischen FPV ( CPV
Grn: Unterschiede zwischen CPV-2 ( CPV-2a/b
Gelb: Varianten innerhalb von CPV2a/b
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